Пероксидазная активность каталазы в отношении этанола
определялась спектрофотометрически по скорости образования
семикарбазона в результате взаимодействия образующегося в ходе
ферментативной реакции ацетальдегида с семикарбазидом. В 3 мл
инкубационной смеси, приготовленной на основе 50 мМ Na-
фосфатного буфера (рН=7.4), содержались: 20 мкл гомогената,
НгСЬ-генерирующая система (10 мМ глюкозы и 0.1 U/мл глюкозо-
оксидазы; 100 мкмоль ШОг/л/мин [70]), 20 мМ семикарбазида, 50
мМ этанола в качестве субстрата. Регистрировали увеличение по
глощения пропускаемого через раствор света с длиной волны 224
нм, что отражало накопление семикарбазона, эквивалентное про
дукции ацетальдегида в ходе реакции [80].
Начальную и конечную концентрации ацетальдегида в инку
бационной смеси вычисляли на основании уравнения регрессии,
рассчитанного по стандартным растворам ацетальдегида. Фоновую
реакцию определяли в отсутствии этанола и вычитали из опытных
показателей. Активность выражали в мкмоль ацетальдегида/мин.
на 1 мг белка.
Активность ксантиноксидазы определялась по скорости на
копления урата при инкубации 0.1 мл надмитохондриальной фрак
ции печени в 0.1 М трис-HCl буфере (рН=8.0), содержащем 0.3 мМ
ксантина [21]. Конечный объем реакционной смеси составил 3 мл.
Реакцию проводили при 37 °С в течение 5-ти минут. Увеличение
содержания мочевой кислоты определялось спектрофотометриче
45
