мерения температуры производились медицинским электротермо
метром ТЭПМ-1.
Приготовление гомогенатов печени и выделение субклеточных фракций
После декапитации крыс под эфирным наркозом, собирали
вытекавшую из шейных сосудов кровь, вскрывали брюшную по
лость, печень освобождали от крови путем перфузии in situ охлаж
денным до 0°С 0.14 М раствором NaCl и извлекали. В стеклянном
гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком готовили 10%
гомогенат печени на основе среды выделения, содержащей 0.25 М
раствор сахарозы, 0.001 М раствор ЭДТА, 0.01 М трис-HCl буфер
(рН=7.5) [18]. Ткань гомогенизировали в течение 30-40 секунд.
Для удаления не полностью разрушенных клеток и ядер гомогенат
центрифугировали 10 минут при 1000 g (t = 0....+2°С). Рыхлый
осадок отбрасывали. Выделение митохондриальной и надмито-
хондриальной фракций печени проводилось методом дифферен
циального центрифугирования полученной надосадочной жид
кости [34] на рефрижераторной центрифуге ЦРЛ-1 (14000 g, 15
мин.). Осадок митохондрий дважды промывали в среде выделения.
Для приготовления лизата митохондрий использовался неионный
детергент тритон Х-100 в конечной концентрации 0.1% [46], после
добавления которого пробы оставляли во льду на 25-30 минут.
Надмитохондриальную фракцию в дальнейшем использовали для
определения активности цитоплазматических ферментов и хеми-
люминесцентного анализа. Все манипуляции, связанные с забором
40
