Диссертация. Индутный А. В. Метаболические предпосылки интолерантности к алкоголю в условиях стресса - page 44

Фоновая реакция в таких условиях ингибируется ацетальдегидом, а
проведение контрольной пробы (без митохондриальной фракции)
позволило вычесть изменение поглощения, связанное с неэнзима­
тической реакцией восстановления НАД.
Вычисленную разность между величинами опытных и кон­
трольных измерений использовали для расчета активности АДГ и
АльДГ, которую выражали в нмоль НАДН/мин. на 1 мг белка.
Активность каталазы в надмитохондриальной фракции гомо-
генатов печени определялась фотоколориметрически, по скорости
разложения пероксида водорода под действием этого энзима. В
инкубационную смесь (V=0.5 мл), приготовленную на основе Na-
фосфатного буфера и содержащую 10 мМ Н
2
О
2
, вносили 0.02 мл
исследуемого гомогената. Через 30 секунд инкубации реакцию
останавливали добавлением титан-сульфатного реактива, при этом
развивалось окрашивание, пропорциональное количеству непро­
реагировавшей перекиси водорода [28]. Пробы фотометрировали
против воды при длине волны, равной 400 нм.
Параллельно, с целью оценки начальной концентрации Н
2
О
2
,
проводили контрольное измерение, в котором гомогенат вносился
в инкубационную смесь после добавления титан-сульфатного реак­
тива. Начальное и конечное содержание субстрата находили с по­
мощью уравнения регрессии, рассчитанного по данным поглоще­
ния пропускаемого света при реакции стандартных растворов пе­
рекиси водорода с титан-сульфатным реактивом. Активность фер­
мента выражали в мкмоль Н
2
О
2
/МИН. на 1 мг белка.
44
1...,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43 45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,...155
Powered by FlippingBook