Диссертация. Индутный А. В. Метаболические предпосылки интолерантности к алкоголю в условиях стресса - page 43

Bonnischen R. К. et al.[76] и Goedde H. W. et al. [110]. Скорость
восстановления НАД при окислении этилового спирта АДГ реги­
стрировалась спектрофотометрически при 340 нм по увеличению
поглощения пропускаемого через исследуемый раствор света. Ин­
кубационная смесь, приготовленная на основе 0.033 М глицин -
щелочного буфера (рН=10.3) содержала 0.5 мМ НАД, 14 мМ эта­
нола, и 0.1 мл надмитохондриальной фракции 10%-го гомогената
печени. Немедленно после внесения гомогената смесь перемеши­
вали и измеряли увеличение оптической плотности в течение 1-й
минуты. Так как активность АДГ определялась в экстракте печени,
содержащем другие НАД-зависимые дегидрогеназы и их субстра­
ты, то для вычета неспецифической НАД-зависимой дегидрогеназ-
ной активности проводили параллельное контрольное измерение, в
котором вместо этанола в кювету вносили буферный раствор.
Определение активности митохондриальной АльДГ проводи­
лось спектрофотометрическим методом, предложенным
Б. М.
Кершенгольцем и Е. М. Серкиной [24] и основанным на регистра­
ции начальной скорости образования НАДН при дегидрогеназном
окислении ацетальдегида. В состав инкубационной смеси, приго­
товленной на основе 0.1 М глицин - щелочного буфера (pH 10.5),
входили следующие компоненты: 0.8 мМ НАД, 18 мМ ацетальде­
гида и 0.1 мл митохондриальной фракции печени в конечном объ­
еме 3 мл. После добавления гомогената к находящимся в кювете
остальным компонентам смеси и перемешивания регистрировали
изменение оптической плотности при 340 нм в течение 3-х минут.
43
1...,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42 44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,...155
Powered by FlippingBook