Bonnischen R. К. et al.[76] и Goedde H. W. et al. [110]. Скорость
восстановления НАД при окислении этилового спирта АДГ реги
стрировалась спектрофотометрически при 340 нм по увеличению
поглощения пропускаемого через исследуемый раствор света. Ин
кубационная смесь, приготовленная на основе 0.033 М глицин -
щелочного буфера (рН=10.3) содержала 0.5 мМ НАД, 14 мМ эта
нола, и 0.1 мл надмитохондриальной фракции 10%-го гомогената
печени. Немедленно после внесения гомогената смесь перемеши
вали и измеряли увеличение оптической плотности в течение 1-й
минуты. Так как активность АДГ определялась в экстракте печени,
содержащем другие НАД-зависимые дегидрогеназы и их субстра
ты, то для вычета неспецифической НАД-зависимой дегидрогеназ-
ной активности проводили параллельное контрольное измерение, в
котором вместо этанола в кювету вносили буферный раствор.
Определение активности митохондриальной АльДГ проводи
лось спектрофотометрическим методом, предложенным
Б. М.
Кершенгольцем и Е. М. Серкиной [24] и основанным на регистра
ции начальной скорости образования НАДН при дегидрогеназном
окислении ацетальдегида. В состав инкубационной смеси, приго
товленной на основе 0.1 М глицин - щелочного буфера (pH 10.5),
входили следующие компоненты: 0.8 мМ НАД, 18 мМ ацетальде
гида и 0.1 мл митохондриальной фракции печени в конечном объ
еме 3 мл. После добавления гомогената к находящимся в кювете
остальным компонентам смеси и перемешивания регистрировали
изменение оптической плотности при 340 нм в течение 3-х минут.
43
