2.2. Методы исследования тяжести эндотоксикоза и интенсивности про
цессов свободно-радикального окисления
Содержание веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ)
определяли отдельно в плазме, на эритроцитах и в моче по методуМ.Я. Ма
лаховой [62]. Для этого крупномолекулярные белки плазмы крови, эритроци
тов и мочи осаждали 15% раствором трихлоруксусной кислоты и регистри
ровали спектральную характеристику водного раствора супернатанта в зоне
длин волн от 238 до 298 нм с интервалом в 4 нм. Расчет конечного результата
ВНСММ производили путем интегрального измерения площади фигуры, об
разованной осью абсцисс, и полученными значениями экстинкций для каж
дого типа определения: плазмы, эритроцитов имочи. Отдельно рассчитывали
показатели при длинах волн 238, 242 и246 нм.
Известно, что в этом спектре длин волн регистрируются вещества ката-
болического происхождения, ксенобиотики, продукты распада клеток тканей,
микробной природы и т. д. [62]. Кроме того, на основании значений экстинк
ций строили спектрограммы (рис.
1
).
Количество ВНСММ определяли по формулам:
ВНСММ пл.= (Е238 +Е242 +Е246 + ... +Е298)х4 уел. ед.
ВНСММ эр.= (Е238 +Е242 +Е246 + ... +Е298)х4 уел. ед.
ВНСММ м.= (Е238 +Е242 +Е246 + ... +Е298)х4 уел. ед.
Определение концентрации олигопептидов проводили по методике,
предложеннойЛоури [195]. Для этого к 1мл разведенного в соотношении 1:9
супернатанта [61], полученного при осаждении белков исследуемой среды
15%раствором трихлоруксусной кислоты, добавляли
2
мл щелочно-медного
реактива. Полученный раствор инкубировали в течение 10 мин при комнат
ной температуре. Затем добавляли 0,2 мл реактива Фолина-Чокалтеу, пере
мешивали и через 30 мин измеряли величину оптической плотности при
А,=750 нм на спектрофотометре СФ-46. В качестве стандарта использовали
раствор альбумина с заведомо известной концентрацией.
35
