Исследование хемилюминесценции эритроцитов.
В центрифужную
пробирку набирали 3 мл фиколла-триомбласта, осторожно наслаивали
2
мл
гепариниринизированной крови и центрифугировали 50 мин при скорости
1500g. Верхний прозрачный слой плазмы и кольцо, состоящее из лимфоци
тов и тромбоцитов, удаляли. С поверхности эритроцитарной массы при по
мощимикропипетки удаляли пленку гранулоцитов и прилежащий слой эрит
роцитов. Количество эритроцитов разведением физиологическим раствором
доводили до (4,9±0,6)х10 /л. При этом количество лейкоцитов в суспензии
недолжно было превышать
0
,
0 1
х
1 0 9
/л. В этом случае вкладом лейкоцитов в
хемилюминесценцию пробы можно пренебречь. В кювету с 2 мл рабочего
раствора люминола добавляли 0,1 мл эритроцитарной суспензии. Далее про
водили исследование по программе аналогичной используемой при цельной
крови.
В норме хемилюминесценция эритроцитов минимальна. Ускорение
свободно-радикального окисления в эритроцитах, содержащих кислород, ге
миновое железо (инициатор окисления) и липиды (окисляющийся субстрат),
имеетпатогенетическое значение [137].
Достоинствами хемилюминесцентного метода изучения свободно
радикального окисления является его относительная простота, быстрота про
ведения анализа, возможность использования водных растворов и небольшо
гоколичества материала. Кроме того, метод позволяет регистрировать кине
тику процесса окисления и учитывает вклад короткоживущих радикалов в
процессы свободно-радикального окисления [30,134].
В последнее время показано, что перекисное окисление липидов под
держивает «чистоту» внутренней среды многоклеточного организма. Обра
зование и секреция нейтрофилами, моноцитами, эндотелиальными клетками
имакрофагами активных форм кислорода - это этап развития синдрома сис
темного воспалительного ответа [170]. Активация же синтеза клетками анти-
окислительных ферментов - это часть синдрома компенсаторной противо
воспалительной защиты [58]. В силу участия в единой биологической функ
40
