При наличии выраженной интоксикации перестают нормально
функционировать ферменты как анти- так и прооксидантной систем. То есть
быстрая и медленная волны имеют меньшие значения.
2.2.9. Иммунологические методы исследования
Иммунологическое
обследование
включало
определение
количественного уровня субпопуляций Т-лимфоцитов периферической крови
(CD
3
, CD4, CD8, CD
20
), индекса регуляции иммунитета (ИРИ), фагоцитарной
активности лейкоцитов с латексом (ФГА), уровня циркулирующих
иммунных комплексов по Дижону, уровня продукции цитокинов (IL-1J3, IL-2,
IL-4), интерферона-у спонтанного и стимулированного, интерферона-а.
Определение количественного уровня субпопуляций Т-лимфоцитов
периферической крови (CD3, CD4, CD8, CD
2
q) проводилось методом
иммунофенотипирования с использованием моноклональных антител
производства ООО «Сорбент» (г. Москва), согласно прилагаемым
рекомендациям. Периферическую кровь забирали из локтевой вены в
пробирки с гепарином (25 ME на 1 мл крови) и тщательно перемешивали.
Выделение мононуклеарных клеток проводили в градиенте плотности
фиколл-верографин (плотность 1,077 г/мл) центрифугированием при 400 g в
течение 40-45 минут. Собранные из интерфазы мононуклеары дважды
отмывали раствором Хенкса. Затем к клеточному осадку добавляли 350 мкл
среды 199 или RPMI-1640 и тщательно ресуспендировали. Полученную
клеточную взвесь разливали в пластиковые пробирки по 50 мкл, затем
вносили по
20
мкл рабочего раствора моноклональных антител и
инкубировали 30 мин при комнатной температуре. Затем вносили по 20 мкл
фрагментов антител к иммуноглобулинам мыши, меченных ФИТЦ, и
продолжали инкубацию еще 30 минут. По окончании инкубации клетки
дважды отмывали раствором Хенкса. По 10 мкл клеточного осадка из каждой
пробирки помещали на предметное стекло и прикрывали покровным
стеклом. Подсчет клеток производили на люминисцентном микроскопе
108
