47
нескольких смесях физиологического фосфатного буфера (ФСБ), pH
7,2 в течение суток при t 2°С, затем в ФСБ, содержащем 1% боргидрид на
трия для связывания свободных альдегидных групп. После получения ре
зультатов световой и электронной микроскопии замороженные образцы из
влекали и монтировали на столике криостата «Криокат Е» («Reichert», Ав
стрия).
Серийные срезы толщиной 20 мкм снимали на покровные стекла, по
крытые раствором поли-Е-лизина. Срезы на покровных стеклах высушива
ли при комнатной температуре в течение 1 часа, затем промывали ФФБ в
течении часа при t 4°С и инкубировали с 1 % раствором бычьего сыворо
точного альбумина («Sigma», США), 30 мин. при комнатной температуре.
Затем, не промывая криостатные срезы инкубировали со специфическими
сыворотками («Boehring», ФРГ) в течение ночи при t 4°С.
После этого срезы промывали в нескольких сменах ФФБ в течении
суток при t 4°С и инкубировали с вторичными антителами меченными
пероксидазой хрена или их F(ab)2 - фрагментами («Amercham», Англия) 2 часа
при t 37°С. После промывки ФФБ в течении 4 часов проводили фиксацию 1%
глютаральдегидом на ФФБ 20 мин. с выявлением пероксидазы с диаминобен-
зидином. После промывки ФФБ срезы фиксировали 1% 0 S0 4 на 0,1 м како-
дилатном буфере, pH 7,2 в течение часа, обезвоживали в спиртах восходящей
крепости и заключали в аралдит, используя высокопараллельную заливку. По
сле полимеризации покровные стекла удаляли погружением в жидкий азот.
Эпоксидную пластину со срезами помещали под световой микроскоп, где
предварительно оценивали результаты реакции и прицельно выбирали нужные
участки. Неокрашенные или окрашенные только уранил-ацетатом ультратон-
кие срезы исследовали под электронным микроскопом EM-410 («Philips»,
Нидерланды).
