46
суду почки, фиксировали наружный цилиндр и вводили в ткань почки внутрен
ний стержень на глубину 1,5 см. После этого зафиксировав стержень и смещая
по нему в глубь наружный цилиндр - «вырезали» столбик почечной ткани
длиной 1,5 см, заключенный в выемке иглы.
Метод иммуноэлектроннои микроскопии
предложен А.А.Ивановым
[53]. Для префиксации использовали ряд известных фиксаторов периодатли-
зинпараформальдегид, 2 % параформальдегид, 4 % параформальдегид с 0,1 %
глютаральдегидом. Материал фиксировали в течение ночи при t 2 С. При под
готовке ткани к замораживанию применили криопротекторы диметилсульфок-
сид, сахарозу, глицерин. Для замораживания биоптатов использовали сжижен
ный фреон-22 с последующим хранением образцов в жидком азоте или в низ
котемпературном холодильнике, сухой лед со спиртом.
Сравнительные результаты действия фиксаторов на антигены почечного
клубочка оценивали по интенсивности свечения при иммунофлюоресцентной
микроскопии.
Контролем служили нефиксированные криостатные срезы. Оценку
сохранности ультраструктуры проводили на ультратонких срезах, окрашен
ных уранилацетатом и цитратом свинца.
Иммуногистохимическое обследование осуществляли, используя не
прямой иммунопероксидазный метод с постановкой стандартных контро-
лей [271].
Оптимальным сочетанием для обработки биоптатов почки является
фиксация смесью 2% параформальдегида с 0,05% сапонином, в течении ча
са с последующей дофиксацией 2 % параформальдегидом в течении ночи
при t 2°С, пропиткой нарастающими концентрациями глицерина (10, 20,
25%) и последующим помещением их в камеру низкотемпературного холо
дильника (-85°С). Полученный биоптат почки делится на 3 части: для све
тооптических методов исследования, обычной электронной микроскопии и
иммуноэлектронной микроскопии. Фиксированные биоптаты промывали в
