48
киллеры; CD3
+
16
+
/56
+
- T - натуральные киллеры. Степень ранней активации
лимфоцитов определяли по экспрессии ими СD25 (рецептор интерлейкина-2).
Возможный исход лимфоцитов в апоптоз оценивали по экспрессии на их
поверхности CD95 (Fas-антиген, опосредующий апоптоз). Определяли также
HLA-DR – поздняя активация лимфоцитов; CD3
+
HLA-DR – поздняя активация T–
лимфоцитов; IRI – иммунорегуляторный индекс: соотношение Т-
хелперов/индукторов (CD3
+
CD4
+
к цитотоксическим (CD3
+
8
+
).
В основе проточной цитометрии лежит проведение оптических и
флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой
вместе с потоком жидкости луч монохроматического света (обычно света лазера).
В этом случае физические свойства клеток (размер или цитоплазматическая
гранулярность) могут быть измерены на любой отдельной неокрашенной клетке.
Клетки также могут быть помечены специфическими красителями,
окрашивающими ДНК, РНК или белок, или целым набором флюорохром-
конъюгированных антител, направленных к мембранным и внутриклеточным
компонентам клеток [133]. Пробу окрашенных флюоресцирующими маркерами
клеток помещали в контейнер для проб проточного цитометра. Из него пробу
через наконечник специальной конструкции под давлением впрыскивали в центр
движущегося c высокой скоростью в том же направлении потока жидкости.
Вследствие этого клетки, подхваченные потоком жидкости, образуют «цепочку»,
причем каждая клетка окружена жидкой «оболочкой».
Геометрия наконечника позволяет предотвратить турбулизацию потока
суспензии исследуемых клеток и ее перемешивание с обтекающей жидкостью. В
измерительной камере прибора молекулы некоторых клеточных структур,
пересекая луч монохромного лазера, поглощают свет определенной длины волны
и переходят в возбужденное состояние. Возвращаясь через короткое время в
исходное состояние, клетки испускают кванты света с иными длинами волн. Это
вторичное излучение, имеющее строго определенные для каждого вида клеток
или их структур длины волн, проходя через оптическую систему прибора (линзы,
фильтры, двухцветные зеркала), регистрируется фотоэлектронным умножителем,
