49
который преобразует его в электрические сигналы, поддающиеся компьютерной
обработке. Два или три флюоресцентных сигнала, каждый из которых
свидетельствует о реакции одного МКА со специфическим распознаваемым
антигеном, могут быть зафиксированы вместе с сигналами переднего (FSC-
forward scatter) и бокового рассеяния (SSC-side scatter) света. Сигналы рассеяния
света, характеризующие размер клетки (FSC), а также цитоплазматические и
мембранные особенности (SSC), связывают результаты флюоресцентного анализа
с морфологически определенными популяциями. Полученные данные могут быть
записаны, проанализированы и представлены в виде гистограмм.
Анализ антигенной экспрессии осуществляли на проточном цитометре с
использованием программного обеспечения для анализа больших массивов
данных. Возбуждение флюоресценции происходит при прохождении клеткой
фокального пятна аргонового лазера, охлаждаемого воздухом (мощность 15mW,
испускаемая длина волны 488нм). Учет флюоресценции осуществляется при 512-
547нм, 572-591нм и более 610нм для FITC, PE и PerCP/PE-Cy5 каналов
флюоресценции на первом (FL1), втором (FL2) и третьем (FL3) фотоумножителях
соответственно. Таким образом, получали данные по прямому (FSC) и боковому
(SSC) светорассеянию, а также по флюоресценции клеток, связавших
флюорохром-конъюгированные антитела.
Проточная цитометрия обладает рядом преимуществ перед традиционной
цитометрией, в числе которых: 1) возможность исследования в ходе одного
анализа значительно большего числа клеток (более 100000, тогда как
микроскопия позволяет исследовать только несколько сотен клеток), что
позволяет получать статистически достоверные результаты и выявлять редкие
типы клеток; 2) возможность проведения количественных измерений путем
дифференцировки интенсивности рассеяния/флуоресценции при различных
длинах волн; 3) возможность одновременного исследования различных
характеристик и структурных компонентов одной клетки. Типичный аппарат
для проведения проточной цитометрии позволяет определять до 5-10 различных
параметров клетки, таких как размер, содержание белков, ДНК, липидов,
