k421 - page 812

ВестникНОМУС. Сборникматериаловнаучной сессии-2013
812
Для нашего эксперимента была выбрана модель, в которой используются
крысы, плавающие с грузом 10% от массы тела (Корнякова и др.,
2008).Методом случайной выборки крыс делили на 2 группы (n=15). Первую
группу составили контрольные животные, вторую – крысы с чрезмерным
режимом физической нагрузки (ЧФН) плававшие в течение всего
эксперимента с грузом 10% от массы тела. В течение первых трех недель
животные этой группы плавали через день , а последние две – ежедневно, что
приводило к развитию у них переутомления. Температура воздуха в виварии
составляла 19–21, водыприплавании –28–30оС .
После завершения эксперимента проводился забор почек . Органы, не
размораживая, взвешивали, измельчали и гомогенизировали на 0,15 М
растворе хлорида калия в стеклянном гомогенизаторе Поттера при
температуре 0–2оС . После центрифугирования полученных гомогенатов в их
надосадочной жидкости определяли запланированные биохимические
показатели.
Проведение биохимического анализа. В гомогетатах почек определяли
содержание общего белка при помощи биуретового реактива по стандартной
схеме. Активность глутатионпероксидазы (КФ 1.11.1.9) определяли по
накоплению окисленного глутатиона . В состав реакционной смеси входили:
1 мл фосфатного буфера (0,3 М pH 7,4); азид натрия 12 мМ GSH; 0,2 мл
гомогената; 0,5 мл 1,8 мМ перекиси водорода. Реакцию запускали
добавлением перекиси водорода, останавливали через 2 мин добавлением 1
мл 10% трихлоруксусной кислоты . После центрифугирования определяли
экстинкцию окисленного глутатиона при длине волны 260 нм. Активность
глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2) определяли по скорости восстановления
глутатиона в реакционной среде, содержащей 2 мл фосфатного буфера (0,05
М pH 8,0) 0,2 мл 1 мМ ЭДТА, 0,5 мл 7,5 мМ GSSG, 0,2 мл гемолизата или
гомогената, 0,1 мл 1,2 мМ NADPH при 37о С в течение 10 мин при длине
волны 340 нм (Власова и др., 1990). Активность гамма-