Стр. 19 - 2

19
По результатам исследований Б.Е.Кноринга и Н.М.Чужовой (1979) положительный
результат РБТЛ с ППД-Л (>2%) отметили у 56% впервые выявленных больных с
различными формами активного туберкулеза легких. При изучении взаимосвязи между
показателями туберкулиновых проб и трасформации лимфоцитов отметили, что при
гиперергической реакции на пробу Манту с 5 ТЕ (21 мм и более) положительные результаты
РБТЛ с ППД-Л только у 50% больных, при размере папулы 0–10 мм у 25% больных. По
данным И.А.Сиренко (2001) изменение уровня бластобразования отмечается достаточно
часто на различных этапах туберкулезной инфекции: у 57±6% подростков в начальном
периоде инфицирования туберкулезом, у 51±12% больных активным туберкулезом, у
61±12% впервые выявленных с клинически излеченным туберкулезом и у 87±7% с таким же
процессом, наблюдаемых диспансерами более 2 лет, несколько реже (25±13%) у
инфицированных туберкулезом более 2 лет. Невысокий процент выявления повышенного
уровня бластообразования можно объяснить потерей лимфоцитов на этапе их выделения (на
фекол-верографине), по данным Ю.И.Пацулы (1981) выход клеток составляет от 37 до 90,7%
(в среднем 67,3%). В работах Ainiti et al. (1975) отметили, что после выделения лимфоцитов
на фекол-верографине для дальнейшей работы с клеткой допускается их выход не менее
70%. По данным А.Бейум (1980) потери клеток происходят и за счет последующего их
отмывания (до 20%). По мнению К.А.Лебедева (1990) для оптимального протекания РБТЛ
необходимо присутствие макрофагов, поэтому использовать высокоочищенные лимфоциты
не рекомендуется.
Модифицированная РБТЛ с ППД-Л (мРБТЛ с ППД-Л). Разработанная реакция на
основании РБТЛ позволила повысить информативность данного иммунологического теста.
При выполнении теста исключается селективная потеря Т-лимфоцитов и других клеток
крови, принимающих участие в реакции (макрофаги). Возможность использования малого
объема крови (200 мкл). В реакции используется несколько доз антигена (помимо
оптимальной).
Постановка РБТЛ проводится по E.Bloemence et al. (1989) в модификации
Ю.И.Пацулы, с использованием микрокультур цельной крови с ФГА и ППД-Л (аллерген
туберкулезный очищенный сухой, сертификат № 000718, паспорт серия 153, контрольный №
ОБТК 526, соответствует требованиям ФС 42-3302-96) без выделения лимфоцитов.
Гепаринизированную кровь (25ЕД гепарина на 1 мл крови) культивировали в круглодонных
иммунологических планшетах, в полной ростовой среде (ПРС) (среда 199, содержащая 10%
эмбриональной телячьей сыворотки, L-глютамин (2мМ), HEPES (10мМ), гентамицина
сульфат 50 мкг/мл) – контрольные образцы крови. Опытные образцы крови культивировали
в ПРС, содержащей ФГА (0,06мл) и ППД-туберкулин (0,06 мл) в 6 разведениях (50; 25; 12,5;
6,25; 3,1; 1,55 мкг/мл) в течение 120 часов. За 18 часов до окончания культивирования в
культуры клеток (контрольную и опытную) вносили по 1 мкCi 3Hı-тимидина. По окончании
культивирования клетки крови собирали полуавтоматическим сборщиком клеток на
стекловолоконные фильтры и высушивали. Подсчет радиоактивности в имп/мин проводили
автоматически в сцинтилляционной жидкости с помощью «Betta-2» камеры. Оценку уровня
специфического клеточного ответа проводили по определению индекса стимуляции.
Для определения диагностического критерия инфицированности микобактериями
туберкулеза, активности туберкулезного процесса и оценки эффективности специфической
терапии, проведен клинико-иммунологический анализ 279 наблюдений у детей в возрасте 2–
17 лет, из них 117 детей – больные туберкулезом, 131 ребенок, инфицированный
микобактериями туберкулеза по результатам туберкулинодиагностики и не инфицированные
дети – 31 ребенок.
В исследованиях была определена специфичность и чувствительность мРБТЛ с ППД-
Л. Установлена высокая специфичность – 97,9% и чувствительность метода – 97,8%. Доля
истинных результатов мРБТЛ с ППД-Л составила 97,8±1,1%. Был установлен и высокий