Упрощенная HTML-версия
18
Высокая чувствительность (теоретически возможно определять единичные
M.tuberculosis в образце) и быстрота проведения анализа (1–2 дня) чрезвычайно ценны для
клинической практики. Проблема специфичности ПЦР в диагностике туберкулеза
обусловлена высоким риском ложноположительных результатов, поскольку продукты
амплификации (фрагменты ДНК) легко могут попасть в исследуемые образцы и служить
матрицей для новых реакций. По данным И.Б.Викторова и А.Л.Ханина (2003)
чувствительность ПЦР 14,3%, специфичность 87,5%.
По результатам исследования Е.А. Марениной ДНК МБТ методом ПЦР в крови
определяли у 59,3% детей с усиливающейся туберкулиновой чувствительностью и у 60,9%
детей при гиперергических реакциях на пробу Манту с 2 ТЕ. В группах риска по результатам
туберкулинодиагностики положительные результаты ПЦР на ДНК МБТ были выявлены у
60,3% детей. У детей из группы с установленным диагнозом локального туберкулеза
положительные результаты на наличие ДНК МБТ в крови установлены в 46,8%.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) с туберкулином (ППД-Л).
Данная реакция служит для оценки состояния специфического клеточного иммунитета
(появление сенсибилизированных лимфоцитов является в отличие от образования антител
очень ранним специфическим этапом иммунного ответа) и используется в клинике (особенно
в комплексе с рядом других иммунологических тестов) для дифференциальной диагностики
туберкулеза, оценки активности его течения и выявления минимальной активности
туберкулезных поражений. Механизм этой реакции состоит в трансформации лимфоцитов в
бластные клетки под действием специфического митогена – туберкулина. Реакция состоит из
3-х этапов:
1.
выделение лимфоцитов (или лейкоцитарной массы);
2.
культивирование лимфоцитов (лейкоцитов) с ППД-Л;
3.
оценка результатов.
Данную реакцию можно оценивать морфологическим методом (подсчет визуальный в
окрашенных мазках – может давать субъективные ошибки), а также по степени активности
включения
3
Н-тимидина (используя для этого автоматический сцинтилляционный счетчик).
При культивировании лимфоцитов в подопытные флаконы в культуральную жидкость
вносят туберкулин (туберкулин-сухой лиофилизированный, Ленинградский ин-т вакцин и
сывороток). Оптимальная конечная концентрация его составляет 60 мкг/мл. Флаконы,
содержащие клетки и необходимые ингредиенты для их культивирования, помещают в
термостат при 37°С и инкубируют в течение 4-х суток (96 часов).
В контрольных культурах (без ППД-Л) или в культурах клеток с ППД-Л от здоровых
туберкулин-отрицательных лиц доля бластных клеток обычно не превышает 1%.
Положительным результат считается, когда число бластов достоверно превышает
контрольный уровень (не менее, чем в 2 раза).
Для фазы инфильтративной вспышки заболевания с тенденцией к прогрессированию
характерна низкая степень бластообразования в культурах (0–5%). В этой фазе заболевания,
но при начальном обратном развитии туберкулезных поражений величина
бластообразования в культурах, как правило, значительно возрастает (10–20%) и зависит от
темпов положительной динамики. В фазе рассасывания и уплотнения процент
бластоподобных клеток в культурах остается высоким, постепенно снижаясь с потерей
активности процесса (5–10%). Усиление РБТЛ совпадает с повышением защитных сил
организма.
Степень пролиферативной реакции зависит от технических условий постановки
реакции: качества питательной среды, приготовленной культуральной жидкости, т.е.
входящих в ее состав ингредиентов, и, особенно, присутствия или отсутствия
аутологической сыворотки либо плазмы, а также от вида применяемого туберкулина и его
коцентрации.