Упрощенная HTML-версия
В контрольных культурах (без ППД-Л) или в культурах клеток с ППД-Л от здоровых
туберкулин-отрицательных лиц доля бластных клеток обычно не превышает 1%.
Положительным результат считается, когда число бластов достоверно превышает
контрольный уровень (не менее, чем в 2 раза).
Для фазы инфильтративной вспышки заболевания с тенденцией к прогрессированию
характерна низкая степень бластообразования в культурах (0-5%). В этой фазе заболевания,
но при начальном обратном развитии туберкулезных поражений величина бластообразования
в культурах, как правило, значительно возрастает (10-20%) и зависит от темпов
положительной динамики. В фазе рассасывания и уплотнения процент бластоподобных
клеток в культурах остается высоким, постепенно снижаясь с потерей активности процесса
(5-10%). Усиление РБТЛ совпадает с повышением защитных сил организма.
Степень пролиферативной реакции зависит от технических условий постановки
реакции: качества питательной среды, приготовленной культуральной жидкости, т.е.
входящих в ее состав ингредиентов, и, особенно, присутствия или отсутствия аутологической
сыворотки либо плазмы, а также от вида применяемого туберкулина и его коцентрации.
По результатам исследований Б.Е.Кноринга и Н.М.Чужовой (1979) положительный
результат РБТЛ с ППД-Л (>2%) отметили у 56% впервые выявленных больных с различными
формами активного туберкулеза легких. При изучении взаимосвязи между показателями
туберкулиновых проб и трасформации лимфоцитов отметили, что при гиперергической
реакции на пробу Манту с 5 ТЕ (21 мм и более) положительные результаты РБТЛ с ППД-Л
только у 50% больных, при размере папулы 0-10 мм у 25% больных. По данным И.А.Сиренко
(2001) изменение уровня бластобразования отмечается достаточно часто на различных этапах
туберкулезной инфекции: у 57±6% подростков в начальном периоде инфицирования
туберкулезом, у 51±12% больных активным туберкулезом, у 61±12% впервые выявленных с
клинически излеченным туберкулезом и у 87±7% с таким же процессом, наблюдаемых
диспансерами более 2 лет, несколько реже (25±13%) у инфицированных туберкулезом более
2 лет. Невысокий процент выявления повышенного уровня бластообразования можно
объяснить потерей лимфоцитов на этапе их выделения (на фекол-верографине), по данным
Ю.И.Пацулы (1981) выход клеток составляет от 37 до 90,7% (в среднем 67,3%). В работах
Ainiti et al. (1975) отметили, что после выделения лимфоцитов на фекол-верографине для
дальнейшей работы с клеткой допускается их выход не менее 70%. По данным А.Бейум
(1980) потери клеток происходят и за счетпоследующего их отмывания (до 20%). По мнению
К.А.Лебедева (1990) для оптимального протекания РБТЛ необходимо присутствие
макрофагов, поэтому использовать высокоочищенные лимфоциты не рекомендуется.
Таким образом, не высокая информативность данного метода требует использования
его в комплексе с рядом других иммунологических тестов.
Модифицированная РБТЛ с ППД-Л (мРБТЛ с ППД-Л).
Разработанная реакция на
основании РБТЛ позволила повысить информативность данного иммунологического теста.
При выполнении теста исключается селективная потеря Т-лимфоцитов и других клеток
крови, принимающих участие в реакции (макрофаги). Возможность использования малого
объема крови (200 мкл). В реакции используется несколько доз антигена (помимо
оптимальной).
Постановка РБТЛ проводится по E.Bloemence et al. (1989) в модификации
Ю.И.Пацулы, с использованием микрокультур цельной крови с ФГА и ППД-Л (аллерген
туберкулезный очищенный сухой, сертификат № 000718, паспорт серия 153, контрольный №
ОБТК 526, соответствует требованиям ФС 42-3302-96) без выделения лимфоцитов.
Гепаринизированную кровь (25ЕД гепарина на 1 мл крови) культивировали в круглодонных
иммунологических планшетах, в полной ростовой среде (ПРС) (среда 199, содержащая 10%
эмбриональной телячьей сыворотки, L-глютамин (2мМ), HEPES (10мМ), гентамицина