Упрощенная HTML-версия
Рекомендуемые методы основаны на определении уровня одного из внутриклеточных
фрагментов бактериальной клетки -b-галактозидазы, являющегося маркером белкового
синтеза в клетках Escherichia coli. Предпосылкой при проведении этих исследований является
снижение скорости синтеза b-галактозидазы в присутствии веществ, подавляющих синтез
белка.
Для проверки действия новых соединений на синтез белка и проницаемость клеточной
стенки используют трехкомпонент-ную систему, содержащую культуру клеток Е. coli K-12 в
логарифмической фазе роста, испытуемый препарат в концентрации 0,5 МПК, 1 МПК, 2
МПК и т.д. до конечной концентрации 10 мг/л. По изменению активности b-галактозидазы в
присутствии ее индуктора - изопропил-тио Д-b-галактозида под влиянием испытуемого
вещества определяют его влияние на проницаемость мембраны, скорость и уровень синтеза
фермента.
Для выявления ДНК-повреждающего действия соединений можно использовав тест-
систему, в которой индукцию SOS оперонов в присутствии различных концентраций
испытуемого вещества оценивают по абсолютному значению активности b-галактозидазы и
расчету коэффициента индукции - соотношения абсолютных значений активности фермента
в присутствии ДНК-повреждающих агентов и в необработанной культуре EG1000/pjE43.
Способность тестируемых соединений вызывать разрывы в бактериальной ДНК в данной
системе позволяет оценить предположительно не только механизм повреждающего
воздействия, но и прогнозировать их возможную генотоксичность.
2.1.5. Необходимый объем исследований по оценке активности воспроизводимых
препаратов (дженериков) значительно меньше. Задачей исследования в этом случае является
подтверждение
соответствия
воспроизводимого
препарата
-
исходному
(зарегистрированному в России, желательно выпускаемому фирмой-разработчиком). Набор
референс - микроорганизмов может быть ограничен 1 -2 штаммами на каждый вид, с
использованием только тех видов, которые входят в спектр действия воспроизводимого
препарата. В ходе изучения определяется значения МПК и МБК соединения. Контролем
служат субстанция и лекарственная форма препарата сравнения. Контроль антимикробной
активности не только субстанции, но и лекарственной формы препарата необходим для
исключения возможного влияния на антимикробную активность вспомогательных веществ,
содержащихся в лекарственной форме дженерика.
2.2. Порядок исследования при определении спектра антимикробного действия и
активности нового соединения in vitro состоит из ряда этапов
2.2.1. Первичная оценка изучаемых соединений на чувствительность к антибиотикам
эталонных штаммов различных видов грамотрицательных и грамположительных
микроорганизмов.
2.2.2. Детальное изучение степени антибактериальной активности соединений в
отношении штаммов грамотрицательных играмположительных микроорганизмов из
международных коллекции с известными механизмами резистентности.
2.2.3. Исследование активности новых соединений в отношении набора
множественноустойчивых и клинических штаммов условнопатогенных и патогенных
микроорганизмов, оценивают в сравнении с известными препаратами близкой химической
группы или аналогичными по антимикробному эффекту. В случае преимущественной
активности испытуемого вещества в отношении грамположительных микроорганизмов
контролем служат природные пенициллины, полусинтетические пенициллиназоустойчивые
пенициллины; цефалоспорины I-II поколений, макролиды, линкозамиды и др. При