Упрощенная HTML-версия
международных и региональных коллекций) и свежевыделенные клинические штаммы
грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Каждый вид должен быть
представлен 4-5 штаммами с различным набором маркеров антибиотикорезистентности.
2.1.2. Новые антибактериальные препараты должны быть оценены также на наличие
активности в отношении таких проблемных возбудителей, как метициллинорезистентные
стафилококки; устойчивые к бензилпенициллину Streptococcus pneumoniae, устойчивые к
ванкомицину
Staphylococcus
spp.,
Enterococccus
spp,
множественноустойчивые
энтеробактерии (Escherichia coli, Citro. Enterobacter spp., Klebsiella spp и др.); Shigella spp.,
Salmonella spp., устойчивые к амикацину и другим аминогликозидам Pseudomonas aeruginosa,
другие виды псевдомонад (Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia и др.) и
неферментирующих грамотрицательных бактерий (Acinetobacter spp). Эти микроорганизмы
выделяют из клинического материала идентифицируют и оценивают по структуре и уровням
антибиотикоустойчивости.
Определение спектра антибактериального действия и антибиотикочувствительности
проводят методом двукратных серийных разведении на жидкой или плотной питательной
средах. Условия определения (питательная среда, число и характеристика штаммов,
особенности культивирования, сроки учета результатов и др.) зависят от вида возбудителя
(табл. 1-2) [1].
2.1.3. Скорость формирования устойчивости к новым соединениям
Определение рекомендуется проводить на плотных питательных средах, содержащих
концентрации препарата ниже соответствующих значений МПК и двукратно возрастающие
концентрации испытуемых соединений.
Для выявления природноустойчивых мутантов в популяции штамма его подвергают
однократному воздействию препарата, для чего взвесь одно-двухсуточной культуры в
изотоническом растворе хлорида натрия засевают на чашки с агаром, содержащим 25-100
мг/л вещества (в зависимости от установленных значений МПК). Состав среды,
продолжительность и температура инкубации зависит от вида микроорганизма. У выросших
колоний определяют уровень резистентности к препарату.
Частота мутаций устанавливается отношением числа антибиотиустойчивых клеток к
числу особей, выросших на контрольных чашках без антибиотика.
Скорость формирования устойчивости устанавливается при посеве культур (посевная
доза 10 10 микробных тел на чашку Петри) на агар, содержащий двукратно возрастающие
концентрации препарата, используя для дальнейших пересевов последнюю чашку, на
которой обнаружили рост единичных колоний. При оценка результатов устанавливают
степень возрастания устойчивости (колонии, выросшие в присутствии максимальных
концентраций испытуемого вещества) и скорость ее развития (отмечается последний пересев,
после которого прекращается или замедляется возрастание устойчивости).
Стабильность приобретенной устойчивости in vitro у мутантных культур изучают
путем пересевов культур на жидкой или плотной питательной среде без препарата с
периодическим определением (после 5, 10, 15 и т.д. пассажей) МПК не менее, чем для 100
вариантов штамма, по результатам которого устанавливается степень снижения МПК у
вариантов штамма или сохранения их значений на уровне, характерном для мутанта [1].
2.1.4. На этапах последующей детальной оценки нового перспективного соединения
целесообразно изучить мишени и механизмы его антибактериального действия, с
использованием простых тестов. Эти исследования проводятся с целью выявления скорости
формирования устойчивости, способности оказывать разрушающее воздействие на
макромолекулярные структуры бактериальной клетки.