Упрощенная HTML-версия
7.2. Стабильность цитохрома Р-450 оценивают по интенсивности образования
функционально инертного цитохрома Р-420 в процессе инкубации микросом в течение 30
мин при 37°С. Рассчитывают степень спонтанной тепловой инактивации цитохрома Р-450
какизменение в процентах разностей между конечным содержанием этого гемопротеина и
цитохрома Р-420 по сравнению с исходной величиной, а также период полуинактивации
цитохрома Р-450 (время, за которое половина его молекул превращается в цитохром Р-420).
7.3. Каталитическую активность микросом в реакциях метаболической трансформации
оценивают с использованием различных субстратов цитохрома Р-450. Определяют
активность N-деметилазы амидопирина (субстрат I типа) и п-гидроксилазы анилина (субстрат
II типа). Рационально также полярографическое изучение метаболизма гексобарбитала и
амидопирина.
7.4. Дыхательную функцию микросом регистрируют полярографически по скорости
окисления НАД.Н и НАДФ.Н.
7.5. Интенсивность второй фазы биотрансформации - реакций конъюгации оценивают
по активности УДФ-глюкуронилт рансферазы, а также по содержанию в крови
конъюгированного билирубина и скорости экскреции БСФ.
8. Желчеобразовательная функция печени.
Исследование проводят на интактных
животных и животных с СС1 4 -гепатитом. О наличии у потенциальных гепатопротекторов
холеретических свойств судят по скорости секреции желчи и концентрации в ней
билирубина, холестерина и желчных кислот.
9. Перекисное окисление липидов (ПОЛ) и активность антиоксидантной
системы печени.
Исследование проводят вследствие важной роли, которая отводится
антиоксидантному эффекту в механизме терапевтического действия гепатопротекторов при
патологии печени, вызванной ядами-прооксидантами (СС1 4 , бромбензол, парацетамол,
аллиловый спирт и др.). В липидных экстрактах гомогенатов, микросом и митохондрий
печени измеряют содержание появляющихся на начальных этапах ПОЛ диеновых
конъюгатов, имеющих сопряженные двойные связи, а также оснований Шиффа - вторичных
продуктов взаимодействия N-концевых остатков белков, аминокислот и аминогрупп
фосфолипидов с альдегидами, возникающими в ходе реакций ПОЛ. Кинетику образования
низкомолекулярного продукта деградации гидроперекисей жирных кислот - малонового
диальдегида исследуют по реакции с тиобарбитуровой кислотой при стимуляции ПОЛ in
vitro ионами двухвалентного железа и аскорбиновой кислотой или ферментативным путем с
помощью НАДФ.Н.
Функцию антиоксидантной системы печени оценивают по содержанию
восстановленного и окисленного глутатиона, активности глутатионпероксидазы,
глутатионредуктазы, глутатион-8-трансферазы, супероксид-дисмутазы, каталазы, глюкозо-6-
фосфатдегидрогеназы, антирадикальной активности мембранных липидов.
10. Содержание фракций липидов и фосфолипидов в печени. В
липидных экстрактах
гомогенатов, микросом и митохондрий печени интактных животных и животных с
экспериментальной патологией гепатобилиарной системы, получавших потенциальные
гепатопротекторы, определяют суммарное содержание липидов и количество их фракций -
фосфолипидов, свободного холестерина, моно-, диацилглицеридов, свободных жирных
кислот, триглицеридов, эфиров холестерина, а также суммарное содержание фосфолипидов и
количество их фракций. Рациональна идентификация жирных кислот в составе
фосфолипидов печени.
Часть перечисленных методов исследования можно осуществлять в экспериментах на
изолированной печени, перфузируе-мой средой с добавленными гепатотоксинами и ге-
патопротекторами.