Упрощенная HTML-версия
пикноза, лизиса или безъядерных) на 2500 клеток в 40 полях зрения, проводят различные
морфометрические исследования.
Гистохимические показатели состояния печени.
Нуклеиновые кислоты, белки,
гликоген, липиды, активность ферментов в печени выявляют по методикам, описанным в
руководствах. Количественные изменения гистохимических показателей оценивают с
помощью цитофотометрии в проходящем свете. Содержание гликогена и активность
глюкозо-6-фосфатазы рационально определять также биохимическими методами.
* Возможно также использование аминазина, а-аманитина, фаллоидина,
лиофилизированного экстракта бледной поганки, гелиотрша, эндотоксина Е. coli.
3. Ультраструктура паренхимы печени.
Исследования проводят с помощью
электронной микроскопии.
4. Биохимические показатели крови, отражающие метаболизм и функцию
печени.
4.1. Активность ферментов печеночного происхождения в крови. Для
дифференциальной диагностики основных патологических синдромов, установления
эффективности и механизма действия новых гепатозащитных агентов достаточно
исследовать активность индикаторных ферментов цитолитического синдрома (трансаминазы,
ЛДГ, сорбит-, глута-матдегидрогеназы, у-глутамилтрансфераза, альдолаза, уроканиназа,
кислая фосфатаза, фосфолипаза А и др.); секреционных ферментов (холинэстераза) и
экскреционных
ферментов
-
маркеров
холестаза
(щелочная
фосфатаза,
лейцинаминопептидаза, 5'-нуклеотидаза и др.). Из них печеночноспецифическими
ферментами являются уроканиназа, термостабильная фракция ЛДГ, глутамадегидрогеназа.
Основные методы определения активности перечисленных ферментов приведены в
руководствах. Рекомендованы модификации методов определения активности уроканиназы и
фосфолипазы А. Рационально использовать стандартные наборы реактивов для определения
активности ферментов.
4.2. Содержание в крови белков, липидов. углеводов. В сыворотке крови определяют
содержание общего белка, альбуминов, глобулинов (а, а 2 , b, g) общихлипидов, холестерина,
фосфолипидов, триглицеридов, липопротеинов различной плотности и глюкозы.
5. Участие печени в синтезе прокоагулянтов.
В крови определяют содержание
фибриногена, проконвертина, тромбопластина и протромбиновый индекс.
6. Экскреторная функция печени.
В крови измеряют ретенцию БСФ (см. раздел 1),
содержание билирубина и его фракций. Вычисляют коэффициент связывания билирубина как
отношение концентраций связанного с глюкуроновой кислотой и общего пигментов. По
результатам этих исследований можно судить о способности ферментов гепатоцитов
осуществлять реакции конъюгации, так как 80-100% билирубина связывается с
глюкуроновой кислотой.
7. Антитоксическая функция печени.
Исследования проводят на фоне
интоксикации СС1 4 , аллиловым спиртом или D-галактозамином, наиболее глубоко
повреждающих антитоксическую функцию печени, а также у интактных животных с целью
выявления у новых гепатопротекторов свойств индукторов или ингибиторов метаболизма
ксенобиотиков.
7.1. Содержание РНК, белка и цитохромов измеряют в микросомальной фракции
печени, содержащей 90-95% белка ЭПР. Анализы проводят в течение суток после выделения
микросом. Содержание цитохромов Р-420 и Р-450 определяют на двулучевом
спектрофотометре по величине поглощения комплекса восстановленных гемопротеинов с
окисью углерода соответственно при 420 и 450 нм; количество цитохрома b 5 регистрируют
по разнице в поглощении между его окисленной и восстановленной формами.