Упрощенная HTML-версия
галактозамин вызывает острый гепатит, идентичный по морфологическим и биохимическим
изменениям в печени вирусному гепатиту человека.
Исследования проводят прижизненно в динамике и после декапитации животных
через сутки после последнего введения гепатопротекторов. Наиболее информативными
тестами, доказывающими эффективность соединений, испытываемых в качестве
гепатопротекторов, являются следующие:
1. Гексенаповая проба
на мышах (80 мг/кг внутрибрюшинно) и крысах (60 мг/кг
внутрибрюшинно) позволяет по продолжительности наркоза животных оценить скорость
метаболизма гексенала, осуществляемого цитохром Р-450-зависимой моноокси-геназной
системой гепатоцитов, и характеризует состояние одной из приоритетных функций печени -
антитоксической.
2. Проба с бромсульфалеином (БСФ)
свидетельствует о состоянии экскреторной и
антитоксической функций печени. Спектрофотометрически определяют содержание БСФ в
крови крыс через 1,5, 15 и 45 мин после введения красителя (1-5 мг/кг) в хвостовую вену.
Вычисляют коэффициент ретенции БСФ, элиминируемого в виде конъюгатов с цистеином и
глутатионом.
3. Определение
активности
аланинаминотрансферазы
(АЛАТ)
и
аспартатаминотрансферазы (АСАТ) в
сыворотке крови позволяет установить влияние
потенциальных гепатопротекторов на цитолиз гепатоцитов, вызываемый гепатотоксинами.
4. Относительная масса печени
(отношение массы печени в мг к массе тела в г)
характеризует степень выраженности воспалительных процессов в органе.
5. Определение степени жировой дистрофии печени на модели CCl^-гепатита у
мышей и крыс дает возможность оценить терапевтическую эффективность новых
гепатопротекторов в отношении одного из наиболее типичных патологических процессов в
поврежденном органе. Исследование проводят гистохимически с помощью окраски Суданом
III или IV срезов, приготовленных на замораживающем микротоме из фиксированных 10%
нейтральным формалином кусочков печени. Для полуколичественной оценки содержания
липидов используют пятибалльную шкалу:
Минимальная степень ожирения (гепатоциты с жировыми включениями находятся
только по периферии дольки в области триады);
Слабая степень )гепатоциты, содержащие липиды, занимают примерно 1/4-1/3 длины
печеночных балок в перипортальной зоне);
Умеренная степень (подобные гепатоциты занимают 1/3-1/4 длины печеночных балок
по периферии дольки);
Высокая степень (гепатоциты с жировыми каплями занимают 1/2-2/3 длины
печеночных балок);
Максимальная степень (стеатоз распространяется на всю печеночную дольку).
Гистохимический метод обнаружения липидов является более чувствительным, чем
биохимический.
Б. Эксперименты на изолированных гепатоцитах
В экспериментах на изолированных гепатоцитах, поврежденных добавлением в
культуральную среду СС1 4 (2-4 ммоль) или D-галактозамина (1,85-3,5 ммоль), оценивают
жизнеспособность клеток по тестам поглощения трипанового синего (интактные гепатоциты
с неповрежденной цитоплазматической мембраной не окрашиваются при кратковременной
инкубации), выхода АЛАТ, АСАТ и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в среду инкубации.