Упрощенная HTML-версия
Полученные результаты: Публикации (по результатам работы): Список цитированной
литературы: Исполнители: Дата сдачи отчета:
6.11. Тест на неопластическую трансформацию клеток грызунов в культуре
ткани
6.11.1. Термины и определения
Неопластической трансформацией является процесс, в результате которого
нормальные клетки приобретают способность расти в виде опухолей при перевивке их
сингенным животным.
6.11.2. Цель исследования и принцип метода
Целью исследования является выявление способности испытуемого соединения
превращать в культуре ткани нормальные клетки в злокачественные. Принцип метода
состоит в том, что в системе быстро размножающихся соматических клеток
малигнизирующие способности канцерогенов проявляются быстрее, чем в организме, где
имеется иммунологический надзор.
6.11.3. Процедура тестирования
6.11.3.1. Культура клеток
Культуры соматических клеток длительно пассируют на среде, содержащей
тестируемое соединение. Клетки, не обладающие собственной системой метаболической
активации проканцерогенов, выращивают на монослое облученных клеток, обладающих
высокой активностью метаболизирующих ферментов или обрабатывают смесью S-9 из
постмитахон-дриальной фракции печени крыс. Колонии трансформированных клеток
морфологически отличаются от нормальных по внешнему виду и ростовым потребностям, а
также по способности давать опухоли при перевивке сингенным животным. Сравнивают
количество трансформированных колоний в культурах, обработанных тестируемым
соединением со спонтанным уровнем.
6.11.3.2. Метаболическая активация
Для метаболической активации проканцерогенов готовят «кормилку», которая
представляет собой монослой g-облученных клеток (10000 рад) эмбриональных
фибробластов или необлученную свежеприготовленную культуру гепатоцитов взрослой
крысы или мыши. Клетки «кормилки» нежизнеспособны, но они кондиционируют среду и
обеспечивают метаболическую активацию проканцерогенов, к которой клетки
иммортализованных линий не способны. Оптимальной является «кормилка» из первичной
культуры гепатоцитов взрослых грызунов. Эмбриональные клетки первых пассажей от
эмбрионов третьего триместра беременности также пригодны, но спектр активирующих
цитохромов у них ограничен.