Упрощенная HTML-версия
отравляет их. Внесение в культуру агента, способного разобщать клеточные контакты,
уменьшает поступление в резистентные клетки токсического 6-тиогуанина, что приводит к
возрастанию выживаемости ТG R -клеток в смешанной культуре.
6.10.3. Процедура тестирования
Основным эффектом в тесте на угнетение метаболической кооперации является
увеличение выживаемости резистентных к 6-тиогуанину клеток при их совместном
культивировании с чувствительными вследствие угнетения межклеточного обмена
токcическим метаболитом 6-тиогуанином.
6.10.3.1. Культура клеток
В тесте используют клетки легкого китайского хомячка линии V-79 дикого типа (TG R -
клетки) и мутантные ( TG S -KneTKH) из
банка клеток, замороженных в жидком азоте на
ранних пассажах.
6.10.3.2. Изучаемые концентрации
Для выбора концентраций испытуемого вещества до постановки основного
эксперимента изучается его цитотоксическое действие. На 10 чашек высевают по 5xl0 5 -
10 6 TG R -KneTOK. Через 4 часа после посева в среду добавляют тестируемое вещество в
логарифмически снижающихся концентрациях, начиная с концентрации 100 мг/мл или 10%
раствора вещества в среде, если оно жидкое. Через 72 часа культуры клеток микроскопируют.
Концентрация, приводящая к гибели более 75% клеток или вызывающая : сраженные
морфологические изменения у 75% клеток, считается токсичной. В основном опыте клетки
экспонируют с последоятельно уменьшающимися концентрациями вещества, начиная с
концентрации, равной половине токсичной дозы.
6.10.3.3. Контроля
В качестве позитивного контроля используют известный промотор - 12-О-
тетрадеканоилфорбол-13-ацетат (ТФА) в концентрации 5-100 мг/мл.
6.10.3.4. Проведение эксперимента
Необходимые для проведения эксперимента оборудование, посуда, реактивы,
питательные смеси и растворы, проведение работ по получению фракции S9, а также
регламент работы с культурами клеток описаны (Bradley et al., 1981; Тест-система для оценки
способности индуцировать генные мутации у млекопитающих, 1977; Barret et al., 1986).
Для того, чтобы разделить специфическое разобщающее и неспецифическое
токсическое действие тестируемого соединения, параллельно с изучением влияния
соединения на метаболическую кооперацию проводят изучение его цитотоксического
действия.
6.10.4. Данные и их представление