Упрощенная HTML-версия
Тестерные штаммы должны иметь уровень спонтанных ревертантов в пределах ожидаемого
на основании литературных данных.
6.1.3.2. Метаболическая активация
В
качестве экзогенной метаболической активации используется фракция S9 печени
крыс, предобработанных соволом (300 мг/кг, однократно, внутрибрюшинно, за5 суток до
забоя) (Белицкий идр., 1987)
[3].
6.1.3.3. Изучаемые дозы
Максимальная доза тестируемого соединения определяется его токсичностью и
растворимостью. Токсичность тестируемого соединения может изменяться при
использовании экзогенной метаболической активации. Для нетоксичных хорошо
растворимых соединений максимальная доза может быть в пределах 1000-5000 мкг/чашку.
Для тестируемых соединений с бактерицидной активностью максимальная доза должна
подавлять рост бактерий не более, чем на 50%, что определяется либо по уменьшению
количества спонтанных ревертантов, либо по подавлению роста бактериального газона. В
любом случае должно проверяться не менее 5 различных доз тестируемого соединения,
различающихся например в 10 раз.
6.1.3.4. Контроли
В каждом эксперименте обязательны одновременно проводимые негативный
(необработанный или растворитель) и позитивный контроли.
В
качестве
растворителя
используются
дистиллированная
вода
или
диметилсульфоксид, а при необходимости и другие растворители.
Позитивные контроли должны быть специфичны для каждого тестерного штамма.
Позитивный контроль для вариантов с метаболической активацией должен соответствовать
типу используемой системы экзогенной метаболической активации.
6.1.3.5. Проведение эксперимента
Необходимые для проведения эксперимента оборудование, посуда, реактивы,
питательные среды и растворы, проведение работ по получению фракции S9, а также
регламент работы с бактериальными культурами описаны в литературе.
Опыт параллельно ведут с использованием микросомальной активирующей смеси и
без нее для регистрации действия как прямых мутагенов, так и непрямых, активность
которых связана с образованием мутагенных метаболитов, учитываемых при работе с
микросомальной фракцией.
В контрольных вариантах опыта вместо испытуемого образца вносят
соответствующий объем растворителя.
6.1.4. Данные и их представление
6.1.4.1. Обработка результатов