Упрощенная HTML-версия
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Работу по использованию КСТ также как и экспертную оценку результатов должны
проводить специалисты, имеющие достаточные профессиональные навыки по применению
методов, составляющих систему тестирования.
6. КРАТКОСРОЧНЫЕ СКРИНИНГОВЫЕ ТЕСТЫ
ДЛЯ ПРОГНОЗА КАНЦЕРОГЕННОСТИ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ
ПРЕПАРАТОВ
И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ
6.1. Мутационный тест на Salmonella typhimurium (тест Эймса)
6.1.1. Термины и определения
Мутационный тест на Salmonella typhimurium является бактериальной тест-системой
для учета мутаций к прототрофности по гистидину при действии химических соединений
и/или их метаболитов, индуцирующих мутации типа замены оснований или сдвига рамки
считывания в геноме этого организма. В данном тесте эти мутации могут происходить или в
сайте исходной мутации, или в другом сайте хромосомы.
6.1.2. Цель исследования и принцип метода
Данный метод предназначен для выявления способности фармакологических веществ
или их метаболитов индуцировать генные мутации у индикаторных штаммов Salmonella
typhimurium.
Фармакологические средства с выраженной антибактериальной активностью изучать в
тесте Эймса нецелесообразно.
Бактерии обрабатываются тестируемым соединением с системой метаболической
активации или без метаболической активации. После инкубации в течение определенного
периода времени подсчитывается количество ревертантных колоний у разных тестерных
штаммов в сравнении с количеством спонтанных ревертантов в вариантах негативного
контроля (необработанные культуры или культуры, обработанные растворителем).
Если тестируемое соединение и/или его метаболиты обладают мутагенной
активностью, то они будут индуцировать обратные мутации от ауксотрофности к
прототрофности по гистидину у гистидин-зависимых штаммов Salmonella typhimurium
(Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей среды с помощью
бактериальных тест-систем ( методические указания ), 1985; Maron, Ames, 1983)
6.1.3. Процедура тестирования
6.1.3.1. Бактерии
В
качестве тестерных организмов используются штаммы Salmonella typhimurium.
Минимальный набор состоит из штаммов ТА 97,ТА98 и ТА100. При необходимости могут
использоваться и другие штаммы.
Каждый штамм должен быть проверен на ауксотрофность по гистидину,
чувствительность к кристаллическому фиолетовому и устойчивость к ампициллину.