Упрощенная HTML-версия
химической структурой можно использовать программы CASE (Klopman, 1984),
MULTICASE (Klopman, 1992) и ЭММА (Баскин и др., 1993).
Настоящие методические рекомендации должны быть пересмотрены через
определенное время и модифицированы в соответствии с прогрессом наших знаний о
молекулярных механизмах химического канцерогенеза.
3. ПРИНЦИПЫ ФОРМИРОВАНИЯ БАТАРЕЙ КСТ
И МИНИМАЛЬНАЯ БАТАРЕЯ КСТ
Большинство КСТ моделирует отдельные стадии канцерогенеза, поэтому наиболее
успешным является их использование в виде батарей, т.е. набора тестов. Подобные батареи
должны отвечать ряду требований. КСТ, включаемые в одну батарею, должны быть
взаимодополняющими, т.е. отличаться или по конечному эффекту (повреждение ДНК,
генные мутации, хромосомные аберрации, неопластическая трансформация, нарушение
метаболической кооперации и др.) или по уровню биологической организации объекта
исследования (прокариоты, эукариоты, системы in vitro, in vivo). При этом
последовательность испытаний предполагает движение от простых к сложным и от кратких
экспериментов к более длительным.
Отбираемые в батарею тесты должны быть надежно верифицированы на соединениях
с известной канцерогенной активностью. По степени верификации различают рутинные
«укоренившиеся» тесты, на которых было испытано не менее 1000 соединений, «развитые» -
не менее 100 и «развивающиеся» - до 100. Эти тесты, при приемлемой стоимости и
достаточной разработанности, должны быть высокочувствительными, специфичными и
обладать большой пропускной способностью.
Для выявления одних и тех же эффектов существует ряд равноценных методов,
которые могут взаимозаменяться. В ряде случаев, взависимости от особенностей
тестируемого соединения, одним методам следует отдавать предпочтение перед другими.
Таким образом, батарея КСТ не является жестко фиксированной. Действующим началом
большинства известных канцерогенов являются высокоактивные метаболиты, поэтому
необходимым компонентом ряда КСТ является система адекватной метаболической
активации испытуемых препаратов.
Исходя из приведенных соображений и реально освоенных методов, в настоящее
время представляется приемлемой следующая минимальная батарея КСТ:
A. Тесты на выявление генных мутаций.
– Тест Эймса Salmonella/микросомы с использованием экзогенной активации
препаратов фракцией S9 печени крыс.
– Равнозначными тестами являются: индукция рецессивных, сцепленных с полом,
летальных мутаций или индукция соматических мутаций на дрозофиле.
Б. Цитогенетические тесты.
– Индукция хромосомных аберраций или микроядер в клетках костного мозга
млекопитающих in vivo.
B. Тесты на повреждения ДНК.
– Репарационный тест на Е.соИ или индукция SOS-ответа бактериальной клетки,
индукция внепланового синтеза ДНК вклетках млекопитающих или выявление повреждений
ДНК методом флуорометрии или щелочной элю ции.
Г. Тесты на промоторную активность.
– ГФРТ-тест на нарушение метаболической кооперации в смешанной культуре
соматических клеток млекопитающих.