Упрощенная HTML-версия
подогретого до 37 °С раствора Тироде без глюкозы, после легкого массажа брюшной стенки
в течение 1-1,5 мин делают ножницами по средней линии разрез длиной 1,5-2 см,
переворачивают тушку разрезом вниз и собирают экссудат, стекающий с петель кишечника в
смоченную гепарином пробирку. Препараты готовят на обезжиренных предметных стеклах,
окрашенных 0,3% спиртовым раствором нейтрального красного и высушенных при
комнатной температуре.
К 0,03 мл взвеси тучных клеток добавляют 0,03 мл сыворотки подопытного животного
и 0.03 мл специфического аллергена (например, исследуемого фармакологического средства).
Исследуемое фармакологическое средство должно быть растворимо в воде.
Разведение фармакологического средства обычно составляет 1:100 или более, чтобы в
контроле на антиген дегрануляция тучных клеток не превышала 5%.
Далее препараты покрывают покровным стеклом, края которого смазывают
вазелином, затем инкубируют 15 мин в термостате при 37°С. Препараты микроскопируют
под увеличением х 20.
Оценку результатов проводят дифференциальным способом учета, подсчитывают
показатель дегрануляции тучных клеток (ПДТК) по формуле:
где а,б,с,д - количество (среднее из трех повторений) дегранулированных клеток
соответственно степени дегрануляции (слабо выраженной, умеренной, резкой и степени
полностью дегранулированных клеток). В каждой камере подсчитывают 100 клеток., если
ПДТК превышает 0,2. При постановке реакции необходимо учитывать следующие контроли:
перитонеальной взвеси тучных клеток, аллергена и сыворотки. В контрольных пробах до
нужного объема доводят растворителем (фосфатный буфер рН-7,2): отсутствие подбора
оптимальных доз антигена и исследуемой сыворотки, нарушение рН среды.
4. ПСЕВДОАЛЛЕРГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
В
настоящее время известно большое число веществ, способных при введении в
организм оказывать гистаминли-бераторное действие и вызывать истинные аллергические
реакции. При действии специфического антигена происходит специфическая
гистаминолиберация из тучных клеток (ТК), в результате взаимодействия аллергена с
реагинами, фиксированными на поверхности ТК, что сопровождается секрецией гистамина и
других медиаторов аллергической реакции. Известно, что. многие лекарственные средства и
химические вещества высвобождают медиаторы, в том числе гис-тамин, неспецифически, в
результате прямого действия на ТК и базофильные лейкоциты. Такой механизм гистамино-
либерации характерен для так называемых псевдоаллергических реакций, а вещества,
вызывающие эти реакции, называются неиммунологическими активаторами. В настоящих
методических рекомендациях предлагается использовать метод определения процента
гистаминолиберации из ТК крыс по реакции конденсации медиатора с ортофталевым
альдегидом. Для этой цели наиболее адекватным методом является метод Шор. Кроме метода
Шор, могут быть использованы реакции воспаления (отека стопы крыс и мышей) на уже
известные неиммунологические активаторы (конканавалин А, 48/80, декстран и др.) [20].
4.1. Метод Шор
Работа выполняется на интактных крысах популяции Wistar (1-2 животных для
исследования одного вещества). После дека-питации животному внутрибрюшинно вводят 5-
10 мл подогретого до 25 °С раствора Хенкса, аккуратно массируют живот в течение 90 сек.