Упрощенная HTML-версия
Сенсибилизация животных путем многократного подкожного введения антигена
приводит (после разрешающей внутри-кожной инъекции) к развитию в месте инъекции
геморрагического некротического воспаления, обусловленного образованием специфических
иммунных комплексов.
Сенсибилизацию морских свинок фармакологическим средством проводят подкожно,
пятикратно, с интервалом в 6 суток, в объеме 0,2 мл.
Сенсибилизирующая доза испытуемого препарата - терапевтическая и в 10 раз
превышающая (2 группы животных). Контрольным животным по той же схеме и в том же
объеме вводят растворитель.
Через 10 суток после последней сенсибилизирующей инъекции тест-препарата
сенсибилизированным животным осуществляют введение разрешающей дозы, которую
вводят внутрикожно в объеме 0,05 мл на выстриженном участке кожи. На другом участке
кожи этим же животным вводят растворитель (контроль на реактивность кожи).
Разрешающую дозу тест-препарата определяют на интактных животных. За
разрешающую дозу принимается наибольшее разведение антигена, не вызывающее видимых
изменений в коже через 1 час после внутрикожной инъекции.
Учет реакции проводят визуально и гистологически. Уже через 30 мин на месте
инъекции может развиваться отек и резкая пгаеремия. В течение последующих 2-3 часов
воспалительный очаг уплотняется, кожа становится буро-красной.
Желательно провести гистологическое исследование, при котором, в случае
положительной реакции, может быть обнаружено острое геморрагическое воспаление; в
инфильтрированном участке могут быть видны полиморфно-ядерные лейкоциты.
При большой дозе антигена местные явления нарастают, через несколько суток очаг
может подвергнуться некрозу.
3.5. Метод накожных аппликаций
На выстриженный участок кожи боковой поверхности туловища морских свинок-
альбиносов, ближе к середине туловища, наносят по 3 капли раствора испытуемого вещества,
приготовленного на дистиллированной воде или других растворителях (ацетон, этиловый
спирт, вазелиновое масло и др.). Если вещество нерастворимо, то наносят по 0,5 г мази,
приготовленной на вазелине или ланолине. Дозы для эксперимента определяют в
соответствии с разделом 1.5. Вещество наносится на протяжении 2 недель по 5 раз в неделю
[11].
Реакцию кожи учитывают ежедневно по шкале оценки кожных проб [9]. Этот
эксперимент позволяет выявить опасность развития неаллергического контактного дерматита
в зависимости от дозы изучаемого фармакологического средства.
Исследование сенсибилизирющего действия вещества проводят путем 20 повторных
накожных аппликаций на участок боковой поверхности туловища размером 2x2 см по 5 раз в
неделю. Если наносят жидкость, то ее дозируют пипеткой и берут по 3 капли (1 мл водного
раствора - 60 капель, ацетона - 40, вазелинового масла - 51). Если применяют мазь, то ее
наносят равномерным слоем на весь участок аппликации с помощью глазной стеклянной
лопаточки. Более 20 накожных аппликаций проводить не следует, так как они могут оказать
гипосенсибилизирующее действие, особенно если фармакологическое средство является
слабым аллергеном.
Первое тестирование проводят после 10 аппликаций и, в случае выявления аллергии,
дальнейшее нанесение вещества можно прекратить. При отрицательном или сомнительном
результате число аппликаций обязательно доводят до 20, после чего животных тестируют
повторно.