Упрощенная HTML-версия
тестирование проводят максимальной концентрацией вещества, эмулыированного в
неполном адъюванте Фрейнда (НАФ). Учет реакции проводят через 48-72 часа.
ПАФ:
1 мл ланолина,
3 мл вазелинового масла,
5 мг убитой прогреванием вакцины БЦЖ,
50 мкл твина-20,
0,5 мл дистиллированной воды.
НАФ:
Те же самые компоненты, за исключением убитой прогреванием вакцины БЦЖ. В
качестве метода выбора может быть использована реакция ГЗТ на морских свинках.
3.3. Реакция гиперчувствительности «замедленного» типа
на морских свинках
Животных опытных групп сенсибилизируют однократно, в подушечки 4-х лапок, тест-
препаратом.в смеси с ПАФ в объеме 0,5 мл, в соотношении 1:1. Испытуемый препарат вводят
2 группам животных в дозах: терапевтическая доза и в 10 раз ее превышающая [7].
Контрольным животным аналогичным способом вводят только ПАФ. На 21 день
опыта животным на выстриженный участок спины внутрикожно (в/к) вводят разрешающую
дозу препарата. Разрешающей дозой при в/к введении будет являться та концентрация
препарата, которая у интактных животных не вызывает раздражающего действия. Для
контроля реактивности кожи на другой выстриженный участок кожи вводится в/к 0,05 мл
растворителя (фосфатный буфер рН-7.2 или стерильный физиологический раствор). Через 1
час, 24 и 48 часов определяют наличие положительной реакции. Реакцию читают на
наружной поверхности кожи, или с помощью колометрической линейки СВ. Суворова через
24 часа и оценивают в баллах по следующей шкале [9]:
0– видимой реакции нет;
1– бледно-розовая эритема по всему участку или по его периферии;
2– ярко-розовая эритема по всему участку или его периферии;
3– красная эритема по всему участку;
4– инфильтрация и отек кожи (утолщение кожной складки) при наличии или
отсутствии эритемы;
5– эритема, выраженная инфильтрация, очаговые изъязвления (некроз), возможны
геморрагии, образование корочек.Следует отметить, что гиперергическая реакция,
оцениваемая в 5 баллов развивается крайне редко и в ряде случаев через 3-4 суток.
3.4. Реакция иммунных комплексов
Реакцию целесообразно использовать для выявления способности лекарственных
препаратов вызывать у животных развитие гиперчувствительности, обусловленной
образованием иммунных комплексов [10].
В определенных условиях комплекс антиген-антитело-комплемент, откладываясь в
тканях, обеспечивает развитие выраженного воспаления с нейтрофильной инфильтрацией.
Антителами, ответственными за развитие таких реакций, могут быть IgG и IgM, способные
активировать комплемент по классическому пути. Активация комплемента приводит к
выделению биологически активных веществ, вызывающих повышение проницаемости
сосудов и способствующих фиксации иммунных комплексов на стенках сосудов и развитию
тканевых поражений.