Упрощенная HTML-версия
32
клетках.
Среди биохимических изменений, характерных для апоптоза
выделяют: экспрессию соответствующих генов, синтез белков и РНК,
специфическую деградацию хроматина под действием эндонуклеаз.
Сначала происходит образование крупных фрагментов ДНК, содер-
жащих 700, 200-250, 50-70 тыс. пар оснований (т.п.о.), несколько поз-
же - 30-50 т.п.о. Уже на этой стадии регистрируются конденсация хро-
матина и выпячивания ядерной мембраны, характерные для апоптоза.
Полагают, что именно этот начальный этап фрагментации хроматина
является ключевым событием апоптоза, после осуществления которого
процесс становится необратимым. Более подробно изучен следующий
этап фрагментации ДНК - ее межнуклеосомная деградация, т. е. рас-
щепление в результате формирования разрывов (в основном двуните-
вых) между нуклеосомами с формированием фрагментов, содержащих
180-190 т.п.о. или кратных им по величине. Именно эти фрагменты
выявляются в виде “лесенки” при электрофорезе ДНК апоптических
клеток, что широко используется для идентификации апоптоза (слу-
чайный характер деградации ДНК при некрозе, развивающейся как
следствие нарушения целостности клетки, обуславливает “размазан-
ный” характер зоны миграции ДНК при электрофорезе). Деградация
ДНК обуславливает выход в растворимую фазу низкомолекулярных
фрагментов ДНК - полидезоксирибонуклеотидов, определение кото-
рых также используется для регистрации апоптоза. Процессы деграда-
ции не затрагивают митохондриальную ДНК (Новиков В.С.,
Булавин Д.В., Малинин В.В., 1996; Ярилин А.А., 1996;
Белушкина Н.Н., Северин С.Е., 2001; Kulms D. et al., 2002).
Осуществление различных этапов деградации ДНК связывают
с проявлением активности разных ферментов. Но пока не удалось кло-
нировать гены соответствующих эндонуклеаз. Нет единства в пред-
ставлениях об их природе. Считают, что межнуклеосомальная дегра-
дация ДНК при апоптозе обусловлена активацией резидентной ядер-
ной Са
2+
Mg
2+
- зависимой эндонуклеазы, которая обнаружена вначале в
кортикальных тимоцитах, а затем и в других клетках. Выделена эндо-
нуклеаза с молекулярной массой 18 кД. В интактных клетках она вхо-
дит в состав высокомолекулярного (более 100 кДж) комплекса, а после
воздействия индуктора апоптоза выходит из него в низкомолекуляр-
ной форме - 18 кД (Hokenbery D., 1995; Leigh I.M. et al., 1995; Jost M.,
et al., 1999; Wolf B.B. et al., 1999; Lippens S. et al., 2000).
Описаны молекулы эндонуклеазы с другой молекулярной мас-
сой. Приводились свидетельства в пользу идентичности эндонуклеазы,
обуславливающей межнуклеосомную дегидратацию хроматина и