Упрощенная HTML-версия
9
Результатом циклического процесса является экспоненци-
альное увеличение количества специфического фрагмента ДНК.
«Эффект плато»
Процесс накопления специфических продуктов амплифика-
ции по геометрической прогрессии идёт ограниченное время, за-
тем его эффективность критически падает. Это связано с так
называемым «эффектом плато». Термин «эффект плато» исполь-
зуют для описания процесса накопления продуктов ПЦР на по-
следних циклах амплификации, когда количество ампликонов до-
стигает 0,3-1 пмолей.
Стадии постановки ПЦР
•
Подготовка проб биологического материала
•
Амплификация
•
Способ постановки ПЦР с использованием «горячего
старта»
•
Амплификация молекул РНК
•
Детекция
Варианты подготовки проб биологического материала (кипя-
чение, ферментный протеолиз с депротеинизацией и переосажде-
ние ДНК спиртом, использование сильного хаотропного агента –
гуанидина тиоционата, использование ионообменников типа
Chilex, применение детергентов или обработка материала щело-
чами с последующей их нейтрализацией.
Амплификация (Для проведения реакции амплификации
необходимо приготовить реакционную смесь и внести в нее ана-
лизируемый образец ДНК.). Важно учитывать некоторые особен-
ности отжига праймеров. В анализируемом биологическом об-
разце присутствуют разнообразные молекулы ДНК, к которым
используемые в реакции праймеры имеют частичную, а в некото-
рых случаях значительную, гомологию.