Упрощенная HTML-версия
39
et al. (1975) отметили, что после выделения лимфоцитов на фе-
кол-верографине для дальнейшей работы с клеткой допускается
их выход не менее 70%. По данным А. Бейум (1980) потери кле-
ток происходят и за счет последующего их отмывания (до 20%).
По мнению К.А. Лебедева (1990) для оптимального протекания
РБТЛ необходимо присутствие макрофагов, поэтому использо-
вать высокоочищенные лимфоциты не рекомендуется.
Таким образом, не высокая информативность данного метода
требует использования его в комплексе с рядом других иммуно-
логических тестов.
Модифицированная РБТЛ с ППД-Л (мРБТЛ с ППД-Л). Раз-
работанная реакция на основании РБТЛ позволила повысить ин-
формативность данного иммунологического теста. При выполне-
нии теста исключается селективная потеря Т-лимфоцитов и дру-
гих клеток крови, принимающих участие в реакции (макрофаги).
Возможность использования малого объема крови (200 мкл). В
реакции используется несколько доз антигена (помимо опти-
мальной).
Постановка РБТЛ проводится по E. Bloemence et al. (1989) в
модификации Ю.И. Пацулы, с использованием микрокультур
цельной крови с ФГА и ППД-Л (аллерген туберкулезный очи-
щенный сухой, сертификат № 000718, паспорт серия 153, кон-
трольный № ОБТК 526, соответствует требованиям ФС 42-3302-
96) без выделения лимфоцитов. Гепаринизированную кровь (кон-
трольные образцы) (25 ЕД гепарина на 1 мл крови) культивиро-
вали в круглодонных иммунологических планшетах, в полной
ростовой среде (ПРС) (среда 199, содержащая 10% эмбриональ-
ной телячьей сыворотки, L-глютамин (2мМ), HEPES (10мМ), ген-
тамицина сульфат 50 мкг/мл). Опытные образцы крови культиви-
ровали в ПРС, содержащей ФГА (0,06мл) и ППД-туберкулин
(0,06мл) в 6 разведениях (50; 25; 12,5; 6,25; 3,1; 1,55 мкг/мл) в те-
чение 120 часов. За 18 часов до окончания культивирования в
культуры клеток (контрольную и опытную) вносили по 1 мкCi
³Hı-тимидина. По окончании культивирования клетки крови со-
бирали полуавтоматическим сборщиком клеток на стекловоло-
конные фильтры и высушивали. Подсчет радиоактивности в
имп/мин проводили автоматически в сцинтилляционной жидко-
сти с помощью «Betta-2» камеры. Оценку уровня специфического