Упрощенная HTML-версия
9
«отжиг» (от англ. «annealing»). Праймеры подбирают так, что они
ограничивают (фланкируют) искомый фрагмент и комплементар-
ны противоположным цепям ДНК. Отжиг происходит в соответ-
ствии с правилом комплементарности Чаргаффа, означающим,
что в двухцепочечной молекуле ДНК напротив аденина всегда
находится тимин, а напротив гуанина – цитозин. Если это усло-
вие не соблюдено, то отжига праймеров не происходит. После
отжига праймеров Taq-полимераза начинает достраивание второй
цепи ДНК с 3'-конца праймера.
Элонгация (синтез)
На третьем этапе температуру в реакционной смеси доводят
до оптимума работы Taq-полимеразы, и синтез второй цепи про-
должается с максимальной эффективностью. В случае близкого
значения температуры отжига праймеров и температуры оптиму-
ма работы фермента, становится возможным использовать двух-
этапный ПЦР, совместив отжиг и элонгацию.
Температурный цикл амплификации многократно повторяет-
ся (30 и более раз).
На каждом цикле количество синтезированных копий фраг-
мента ДНК удваивается.
Результатом циклического процесса является экспоненци-
альное увеличение количества специфического фрагмента ДНК.
«Эффект плато»
Процесс накопления специфических продуктов амплифика-
ции по геометрической прогрессии идёт ограниченное время, за-
тем его эффективность критически падает. Это связано с так
называемым «эффектом плато». Термин «эффект плато» исполь-
зуют для описания процесса накопления продуктов ПЦР на по-
следних циклах амплификации, когда количество ампликонов до-
стигает 0,3-1 пмолей.