Упрощенная HTML-версия
90
ряет гидролиз эфирной связи между фосфорной кислотой и гли-
церином. Фосфолипаза Д катализирует отщепление фосфорной
кислоты от азотистого основания (этаноламина, холина), таким
образом, освобождая фосфорную кислоту.
Фосфолипазы в большом количестве содержатся в яичном
желтке. Если к суспензии лецитина, приготовленной из сухого
яичного желтка, добавить вытяжку из поджелудочной железы, то
через некоторое время можно отметить с помощью качественной
реакции накопление неорганического фосфора.
Принцип метода.
Метод основан на способности молибде-
нового реактива образовывать специфическое окрашивание с не-
органическим фосфатом, высвобождающимся из фосфолипида
после действия фосфолипаз
Ход работы.
В 2 пробирки вносят по 5 капель суспензии ли-
цетина. В первую пробирку добавляют 2 капли вытяжки из под-
желудочной железы, во вторую – 2 капли воды. Обе пробирки
помещают в водяную баню при температуре 37–38 °С на 30 ми-
нут. После этого в обе пробирки приливают по 5 капель молиб-
деновокислого аммония и нагревают до кипения. При наличии
неорганического фосфата наблюдается появление желто-зеленого
осадка.
Лабораторная работа № 2:
«К
ОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ
ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ЛИПАЗЫ
»
Принцип метода.
Об активности панкреатической липазы
судят по количеству освободившихся высших жирных кислот,
которые оттитровывают щелочью.
Ход работы.
К 10 мл молока приливают 2 мл панкреатиче-
ского сока. Перемешивают и тотчас же берут 2 мл смеси в широ-
кую пробирку, добавляют 2 капли фенолфталеина и титруют 0,05
N щелочью до появления розового окрашивания (контрольная
проба). Оставшуюся смесь ставят на водяную баню (t = 37–38
о
С)
и через каждые 10 минут берут пробы для титрования. По дан-
ным титрования вычисляют активность панкреатической липазы,
выражая ее количеством карбоксильных групп ВЖК.