Упрощенная HTML-версия
52
3.
Написать реакции переаминирования при участии аланина-
минотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы
(АсАТ).
Определение активности ферментов
Чтобы оценить количество фермента пользуются условными
величинами, характеризующими активность фермента. За актив-
ность фермента (Е) принимают количество субстрата (S) или
продукта реакции (Р), превращенного в единицу времени (t).
S
P
Е = –––––; Е = ––––––.
t
t
Методы определения активности ферментов могут быть раз-
делены на две основные группы.
1.
Метод конечной точки.
В данном случае определяется ко-
нечный продукт, образовавшийся после известного периода
инкубации фермента с субстратом в соответствующем буфе-
ре, путем измерения опытной и контрольной проб, т. е., из-
мерение проводится в двух точках. Для этого используется
специальная химическая реакция. Количество вещества
определяется фотометрически.
2.
Кинетический метод,
с помощью которого в ходе фермен-
тативной реакции непрерывно или периодически определяют
потребление субстрата, кофермента либо образование мета-
болита за выбранные промежутки времени. Этот метод назы-
вают также методом непрерывной регистрации.
Условия определения активности ферментов
Для определения активности фермента необходимо соблю-
дать стандартные условия, которые устанавливаются для каждого
фермента из его кинетических характеристик.
1.
Необходимо использовать оптимальное для определяемого
фермента значение рН среды.