Упрощенная HTML-версия
31
7.
Вторичная и третичная структуры РНК, ее функциональные
виды (и-РНК, т-РНК, р-РНК). Строение т-РНК. Рибозимы –
новый тип биокатализаторов.
Лабораторная работа № 1:
«Р
АЗДЕЛЕНИЕ АЛЬБУМИНОВ И ГЛОБУЛИНОВ БЕЛКОВ
СЫВОРОТКИ КРОВИ МЕТОДОМ ВЫСАЛИВАНИЯ
»
Высаливание – обратимая реакция осаждения белков из рас-
творов с помощью больших концентраций солей. Для высалива-
ния чаще всего используют сульфат аммония, отличающийся
очень высокой растворимостью в воде, а также сульфат натрия,
хлорид натрия и другие соли щелочных и щелочноземельных ме-
таллов.
При высаливании происходят дегидратация макромолекул
белка и потеря заряда. На процесс высаливания влияет ряд фак-
торов: гидрофильность белка, его относительная молекулярная
масса, заряд, в связи с чем для высаливания различных белков
требуется разная концентрация одних и тех же солей. Альбумины
осаждаются в насыщенном растворе (NH
4
)
2
SO
4
, а глобулины в
полунасыщенном, т. к. у глобулинов большая относительная мас-
са, чем у альбуминов.
Ход работы.
К 10 каплям сыворотки крови добавляют 10 ка-
пель насыщенного раствора сульфата аммония и смешивают. По-
лучается полунасыщенный раствор сульфата аммония, в котором
выпадает осадок глобулина. Через 5 минут осадок отфильтровы-
вают. К фильтрату добавляют измельченный порошок сульфата
аммония до полного насыщения (т.е. пока новая порция порошка
остается нерастворенной). Выпавший осадок альбумина отфиль-
тровывают. С фильтратом проделывают биуретовую реакцию для
доказательства отсутствия белка. Метод высаливания белков ши-
роко используется в клинической практике в диагностических
целях для разделения альбуминов и глобулинов и определения
альбумино-глобулинового коэффициента в сыворотке крови. В
научно-исследовательских лабораториях при выделении и очист-
ке различных белков (ферменты, гормоны и др.), а также в произ-
водственных условиях для получения белковых препаратов (ле-
чебные сыворотки, кристаллические белки и др).