Упрощенная HTML-версия
32
Лабораторная работа №2:
«Р
АЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА НА БУМАГЕ
»
Электрофорез представляет собой один из наиболее удобных
методов для анализа белков сыворотки крови и их фракциониро-
вания.
При помощи электрофореза на бумаге белки сыворотки кро-
ви можно разделить на 5–7 фракций: альбумины, альфа1, альфа2,
бета-, гамма-глобулины.
Принцип метода электрофореза основан на том, что белки,
обладая электрическим зарядом, могут передвигаться в электри-
ческом поле с различной скоростью. Скорость перемещения мо-
лекул различных белков в электрическом поле зависит от вели-
чины заряда, молекулярной массы, условий опыта.
Разделение белков проводится в аппарате для электрофореза
на специальной хроматографической бумаге. Образцы исследуе-
мой сыворотки крови, обладающие зарядом, наносятся на полос-
ки бумаги, смоченные буферным раствором, через которые про-
пускается постоянный электрический ток.
Под воздействием электрического поля белковые фракции
перемещаются к полюсу с противоположным зарядом. При этом
белки сыворотки крови при рН 8,6 заряжаются отрицательно и
перемещаются в электрическом поле от катода к аноду. Быстрее к
аноду будет двигаться более легкая фракция – альбумины.
Затем электрофореграммы окрашиваются красителем в со-
став, которого входит бромфеноловый синий. На электрофоре-
грамме четко выявляются полосы, соответствующие определен-
ным фракциям белков сыворотки крови, производится их количе-
ственная оценка. Содержание белковых фракций сыворотки кро-
ви, полученных при помощи электрофореза на бумаге, колеблет-
ся в следующих пределах:
Альбумины – 55–68 %
Альфа 1-глобулины – 3–6 %
Альфа 2-глобулины – 7–10 %