Упрощенная HTML-версия
20
Лабораторная работа № 1:
«Р
АСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
АМИНОКИСЛОТ НА БУМАГЕ
»
Хроматография – один из эффективных и широко применяе-
мых в биохимических исследованиях методов разделения амино-
кислот. Для проведения хроматографии используют систему рас-
творителей, один из которых является подвижной фазой, а другой
неподвижной.
В зависимости от направления фронта передвижения раство-
рителя различают следующие виды хроматографии: восходящую,
нисходящую, одномерную, двухмерную и радиальную. Располо-
жение отдельных аминокислот обнаруживают после проявления
хроматограмм. Для этого высушенную бумагу обрабатывают
раствором нингидрина и помещают в сушильный шкаф при
100
о
С, т.е. проводят качественную нингидриновую реакцию на
аминокислоты, находящиеся на бумаге.
Скорость перемещения аминокислот выражают коэффициен-
том Rf, который представляет собой отношение расстояния,
пройденного данной аминокислотой, к пути, пройденному фрон-
том растворителя
Rf =
,
где
а – путь, пройденный аминокислотой (расстояние от линии стар-
та до центра пятна)
в – путь, пройденный растворителем (расстояние от линии стар-
та до линии фронта).
Принцип метода.
Метод основан на разной скорости пере-
движения аминокислот на бумаге в зависимости от коэффициен-
та распределения их между неподвижной (вода) и подвижной
(фенол) фазами растворителя.
Чем больше растворимость аминокислоты в водной фазе и
чем меньше ее растворимость в органическом растворителе, тем
медленнее движется аминокислота по сравнению с фронтом ор-
ганического растворителя. Более гидрофобная аминокислота,
лучше растворяющаяся в неполярном растворителе, движется с