Упрощенная HTML-версия
21
большей скоростью от линии старта, чем гидрофильная амино-
кислота.
Порядок выполнения работы.
Квадрат хроматографической
бумаги делят двумя диагональными линиями на 4 сегмента, про-
водят линию старта. Затем в каждый сектор наносят стеклянной
палочкой небольшое количество (1–2 капли) исследуемых рас-
творов аминокислот: аланина, глутаминовой кислоты, лейцина, а
также гидролизат. После нанесения растворов аминокислот хро-
матограмму подсушивают на воздухе и помещают в чашку Петри
(камера), где, налита система растворителей (фенол, вода), за-
крывают ее крышкой и проводят разделение в течение 40–50 ми-
нут. При этом происходит разделение исследуемой смеси на от-
дельные аминокислоты, движущиеся с разной скоростью, соот-
ветственно коэффициенту их распределения между водой и фе-
нолом.
Через 40–50 минут хроматограмму подсушивают в термоста-
те при температуре 95
о
С (10 минут) и обрабатывают раствором
нингидрина, после чего вновь подсушивают в сушильном шкафу
в течение 5 минут при температуре 95
о
С. При этом проявляются
аминокислоты в виде отдельных полос. Для каждой из них рас-
считать коэффициент распределения Rf и сделать вывод о по-
движности аминокислот.
Клинико-диагностическое значение определения аминокислот
в сыворотке крови и моче
Хроматографический анализ свободных аминокислот в сыво-
ротке крови и моче применяется в клинике для диагностики
наследственных заболеваний обмена аминокислот. Изменения в
содержании аминокислот в сыворотке крови и моче наблюдаются
при недостаточной функции печени, а также при нарушении вы-
делительной функции почек.