Упрощенная HTML-версия
180
обсушивают ее фильтровальной бумагой и помещают в чашку
Петри, стоящую на льду.
3 г ткани печени измельчают ножницами и переносят в ста-
кан гомогенизатора, куда предварительно наливают 9 мл охла-
жденного раствора хлорида калия. Стакан помещают в лед и го-
могенизируют с тефлоновым пестиком при 1000 об/мин в течение
40 сек.
Гомогенат разливают в две центрифужные гильзы и центри-
фугируют на ЦЛР при 10 000 g в течение 20 мин при 0–4
0
С.
Надосадочную жидкость сливают в другие центрифужные гиль-
зы, прибавляют раствор хлорида кальция в соотношении 1: 5 по
объему. Перемешивают и вновь центрифугируют при 3000 g в
течение 15 мин при 0–4
0
С.
Надосадочную жидкость сливают. К осадку, содержащему
обогащенную фракцию микросом, добавляют 3 мл раствора трис-
буфера (0,1 М раствор с рН 7,4) и с помощью пипетки, втягивая и
выдувая жидкость, получают взвесь микросом.
2. Изучение гидроксилирования анилина
Для изучения гидроксилирования анилина берут две чистые
пробирки и готовят контрольную и опытную пробы. Последова-
тельность внесения компонентов и их объем приведены в таблице.
Опытная проба
Контрольная проба
№
Компоненты
Объем
(мл)
№
Компоненты
Объем
(мл)
1.
2.
3.
4.
5.
Трис-HCl буфер
Хлорид магния
НАДФ Н
Взвесь микросом
Анилин
0,4
0,4
0,2
0,1
0,11
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Трис-HCl буфер
Хлорид магния
Взвесь микросом
ТХУ
Анилин
НАДФ Н
0,4
0,4
0,1
0,5
0,11
0,2
Обе пробирки помещают на 20 мин в водяную баню при
37
0
С. В опытной пробе реакцию останавливают, приливая 0,5 мл
ТХУ. Далее обе пробы центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин.
Из каждой пробы отбирают по 1 мл надосадочной жидкости
и переносят в две другие пробирки. Затем приливают к ним по