Упрощенная HTML-версия
133
лоты на электрофореграмме. Идентификация нужных фрагментов
ДНК в таком случае возможна только путем гибридизации. Ме-
тод
гибридизации (ренатурации)
основан
на образовании водо-
родных связей между нуклеотидами однонитевого фрагмента мо-
лекулы анализируемой ДНК и комплементарными им нуклеоти-
дами ДНК-зондов.
З
онд гибридизации –
короткий фрагмент ДНК (длиной около
20 нуклеотидов), последовательность оснований которого ком-
плементарна известной последовательности в молекуле ДНК.
Зонды могут быть искусственно синтезированы или выделены из
генома. Для облегчения последующего обнаружения зонда в него
вводится радиоактивная или флюоресцентная метка. Один из ва-
риантов – блот-гибридизация по Саузерну. В процессе гибриди-
зации различают несколько этапов.
Схема проведения блот-гибридизации (по Саузерну)
Рестрикция геномной ДНК и разделение фрагментов в геле
Рестрикция Перенос ДНК
на гель
Денатурация ДНК и перенос (
блоттинг
) с геля на плотный
носитель – нитроцеллюлозный фильтр или нейлоновую мембрану
Перенос ДНК
на фильтр
Гибридизация (ренатурация) с меченым ДНК зондом
(зонд «прилипает» только к комплементарной ДНК)
Фильтр
Фильтр
С
с ДНК – зондом
с ДНК