Упрощенная HTML-версия
132
Рестрикционный анализ
Для того, чтобы выделить ген для последующей идентифика-
ции, необходимо разрезать полученную клеточную ДНК на отно-
сительно небольшие фрагменты. Фрагментация молекулы ДНК
(обеих нитей) –
рестрикция
– достигается с помощью ДНКаз-
эндонуклеаз, называемых ферментами рестрикции (
рестрикта-
зами
). Каждая рестриктаза узнает специфическую последова-
тельность оснований – длиной в 4–6 пар. Места локализации этих
последовательностей в молекуле ДНК называют
сайтами ре-
стрикции
.
Таким образом происходит упорядоченный гидролиз ДНК.
Под действием некоторых рестриктаз расщепление ДНК может
происходить не прямым разрезом через обе цепи ДНК, а с обра-
зованием ступенчатых («липких») концов.
– Х – Х – G
A – A – T – T – C – X – X –
– X – X – C – T – T – A – A
G – X – X –
рестрикция
– Х – Х – G A – A – T – T – C – X – X –
– X – X – C – T – T – A – A
G – X – X –
«липкие» концы
В результате, используя определенный набор рестриктаз,
можно разрезать ДНК в строго установленных местах и получить
заданные фрагменты.
Гибридизация
Образующиеся в результате рестрикции фрагменты ДНК мо-
гут быть упорядочены по длине путем электрофореза в геле.
При полной рестрикционной обработке ДНК эукариот полу-
чается слишком много фрагментов различной длины, так что не
всегда удается определить отдельные участки нуклеиновой кис-