Упрощенная HTML-версия
3. Марри Р. Биохимия человека, 1993.
4. Эллиот В, Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология, 1999.
Тема занятия:
«ОБЩИЕ (ОСНОВНЫЕ) ПУТИ МЕТАБОЛИЗМА
АМИНОКИСЛОТ В ТКАНЯХ»
Вопросы для самоподготовки
1. Источники аминокислот в клетке, пути их использования.
2. Метаболизм аминокислот:
а) реакции переаминирования и их биологическая роль
б) декарбоксилирование аминокислот и биогенные амины
в) виды дезаминирования аминокислот (прямое, непрямое, окислительное,
неокислительное).
Упражнения
1. Написать реакцию трансаминирования между Ала и альфа-кетоглутаровой
кислотой. Дать названия фермента прямой и обратной реакций по международной
номенклатуре.
2. Закончить реакции, записав их формулами:
а) глу + пируват ==> …
б) глу + оксалоацетат ==> …
Указать название продуктов, дать полное название ферментов и коферментов.
3. Напишите уравнение реакций, ведущих к образованию аспарагиновой кислоты
в условиях недостатка Асп и избытка Ала в пище.
Лабораторная работа №1:
«КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ
АлАТ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ»
Принцип метода.
В результате переаминирования, происходящего под действием
аланинаминотрансферазы (АлАТ), образуется пировиноградная кислота (ПВК). При
добавлении 2,4 – динитрофенилгидразина в щелочной среде образуется окрашенный
гидразон пировиноградной кислоты, интенсивность окраски которого пропорциональна
количеству образовавшейся ПВК.
Ход работы.
К 0,5 мл субстратного раствора (альфа-кетоглутаровая кислота и аланин)
добавляют 0,1 мл сыворотки крови и смесь инкубируют при 37 оС 30 минут. Затем
добавляют 0,5 мл 2,4-динитрофенилгидразинового реактива и 5 мл 0,4 н едкого натра,
тщательно перемешивают раствор и оставляют для развития окраски на 10 минут при
комнатной температуре.
Измерение ведут на фотоколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый
светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1см.
Расчет .
Расчет активности фермента проводят по калибровочному графику (стандарт
– пировиноградная кислота).