Упрощенная HTML-версия
Метод основан на способности пептидных групп белков и полипептидов образовывать
в щелочной среде с ионами Сu2+ комплексное соединение фиолетового цвета с красным или
синим оттенком в зависимости от числа пептидных связей в белке.
Биуретовая реакция положительна с белками и пептидами, имеющими не менее двух
пептидных связей
(- С - NH -)
| |
О
Ход определения.
В пробирку к 5 каплям раствора белка прибавляют 6 капель
раствора едкого натра и 2 капли раствора сернокислой меди и перемешивают. Содержимое
пробирки приобретает фиолетовый цвет.
Нингидриновая реакция
Метод основан на взаимодействии нингидрина с альфа-аминогруппой аминокислот,
пептидов, белков с образованием окрашенного комплекса синего или сине-фиолетового
цвета.
При нагревании в присутствии нингидрина происходит окислительное
дезаминирование альфа-аминогрупп аминокислот и пептидов, а молекула нингидрина при
этом восстанавливается.
Восстановленный нингидрин реагирует с аммиаком и другой молекулой окисленного
нингидрина, в результате образуется окрашенное соединение сине-фиолетового цвета.
Ход определения.
К 5 каплям раствора белка приливают 5 капель водного раствора
нингидрина, ставят пробирку на кипящую водяную баню до появления сине-фиолетового
окрашивания.
Ксантопротеиновая реакция
Ксантопротеиновая реакция открывает наличие в белках циклических аминокислот -
триптофана, фенилаланина тирозина, содержащих в своем составе бензольное ядро.
Большинство белков при нагревании с концентрированной азотной кислотой дает
желтое окрашивание, переходящее в оранжевое при подщелачивании.
Реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца этих аминокислот с
образованием нитросоединений желтого цвета.
При подщелачивании возникает хиноидная структура, окрашенная в оранжевый цвет.
Ход определения.
К 5 каплям раствора белка добавляют 3 капли концентрированной
азотной кислоты, нагревают на кипящей водяной бане до появления осадка желтого цвета.
После охлаждения в пробирку по каплям добавляют 10 % раствор едкого натра до
появления оранжевого окрашивания вследствие образования натриевой соли
динитротирозина.
Реакция Фоля
Метод основан на способности белков, в состав которых входят аминокислоты,
содержащие слабо связанную серу (цистин, цистеин), в щелочной среде при нагревании
образовывать сульфид натрия (Na2S), который с плюмбитом натрия (Na2PbO2) дает черный
или бурый осадок сульфида свинца.