Упрощенная HTML-версия
6. Транспортные липопротеины крови, их строение.
Лабораторная работа №1:
«КАЧЕСТВЕННОЕ ОТКРЫТИЕ ДЕЙСТВИЯ
ФОСФОЛИПАЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ»
В поджелудочной железе образуются фосфолипазы А1, А2, С, Д - ферменты,
ускоряющие гидролиз фосфолитпидов пищи. Фосфолипазы А1 и А2 катализируют гидролиз
эфирных связей между глицерином и ВЖК в фосфолипидах. Фосфолипаза С ускоряет
гидролиз эфирной связи между фосфорной кислотой и глицерином. Фосфолипаза Д
катализирует отщепление фосфорной кислоты от азотистого основания (этаноламина,
холина), таким образом, освобождая фосфорную кислоту.
Фосфолипиды в большом количестве содержатся в яичном желтке. Если к суспензии
лецитина, приготовленной из сухого яичного желтка, добавить вытяжку из поджелудочной
железы, то через некоторое время можно отметить с помощью качественной реакции
накопление неорганического фосфора.
Принцип метода.
Метод основан на способности молибденового реактива
образовывать специфическое окрашивание с неорганическим фосфатом, высвобождающимся
из фосфолипида после действия фосфолипаз
Ход работы.
В 2 пробирки вносят по 5 капель суспензии лицетина. В первую
пробирку добавляют 2 капли вытяжки из поджелудочной железы, во вторую – 2 капли воды.
Обе пробирки помещают в водяную баню при температуре 37-38 °С на 30 минут. После этого
в обе пробирки приливают по 5 капель молибденовокислого аммония и нагревают до
кипения. При наличии неорганического фосфата наблюдается появление желто-зеленого
осадка.
Лабораторная работа №2:
«КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ
ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ЛИПАЗЫ»
Принцип метода.
Об активности панкреатической липазы судят по количеству
освободившихся высших жирных кислот, которые оттитровывают щелочью.
Ход работы.
К 10 мл молока приливают 2 мл панкреатического сока. Перемешивают
и тотчас же берут 2 мл смеси в широкую пробирку, добавляют 2 капли фенолфталеина и
титруют 0,05 N щелочью до появления розового окрашивания (контрольная проба).
Оставшуюся смесь ставят на водяную баню (t = 37-38о С) и через каждые 10 минут берут
пробы для титрования. По данным титрования вычисляют активность панкреатической
липазы, выражая ее количеством карбоксильных групп ВЖК.
Процесс гидролиза жира молока под действием панкреатической липазы изображают
графически, откладывая на оси абцисс время взаимодействия фермента и субстрата, на оси
ординат - количество миллилитров щелочи, пошедшее на каждое титрование. Количество
щелочи в миллилитрах, затраченное на нейтрализацию освобождающихся ВЖК, является
мерой активности липазы. В конце работы необходимо вычислить по формуле содержание
карбоксильныхгрупп ВЖК в 100 мл на основании данных последнего титрования,
предварительно вычтя результаты контроля
где:
Х – содержание - СООН групп в миллиграмах на 100 мл