Упрощенная HTML-версия
желтое окрашивание. Интенсивность окраски соответствует содержанию продукта реакции и
отражает активность фермента.
Ход работы.
В пробирку вносят 1 мл субстратно-буферного раствора с рН 10,5,
содержащего глицин, хлористый магний, n-нитрофенилфосфат, гидроокись натрия.
Прогревают в водном термостате при 37 оС в течение 5 минут. Прибавляют 0,1 мл сыворотки
крови, перемешивают и инкубируют в течение 30 минут. Реакцию прекращают добавлением
10 мл 0,02 н раствора щелочи. Перемешивают содержимое пробирки и фотометрируют на
КФК при длине волны 405 нм (синий светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против
контрольного раствора.
Расчет активности.
Активность фермента выражают количеством мкмоль n-
нитрофенола, образующегося за минуту под влиянием фермента, содержащегося в 1 л
сыворотки крови. По калибровочному графику находят количество мкмоль n-нитрофенола и
производят перерасчет за мин на 1 л сыворотки крови по формуле:
Е – активность фермента в мкмоль/мин л;
С – количество n-нитрофенола в мкмоль, найденное по калибровочному
графику;
30 – коэффициент пересчета за 1 минуту;
10000 – коэффициент пересчета на 1 л сыворотки крови.
В норме активность фелочной фосфатазы в сыворотке крови взрослого человека
составляет 98 – 280 мкмоль/мин л.
Клинико-диагностическое
значение
определения
активности
щелочной
фосфатазы в сыворотке крови.
Щелочная фосфатаза присутствует в высоких
концентрациях в печени, костях, плаценте, кишечном эпителии. Каждая из этих тканей
содержит специфические изоферменты щелочной фосфатазы. Увеличение активности
щелочной фосфатазы в сыворотке крови наблюдается при беременности за счет
плацентарной изоформы. В детском возрасте высокая активность отмечается за счет роста
костей. Патологическое повышение активности фермента в сыворотке крови наблюдается
при опухолях костей, рахите, остеомаляции, при первичном гиперпаратиреозе, при
заболеваниях печени, сопровождающихся холестатическим синдромом, при циррозе печени и
других заболеваниях.
Типовые вопросы компьютерного контроля
1. Выберите ферменты, относящиеся к классу оксидоредуктаз.
1) лактатдегидрогеназа
2) оксидаза аминокислот
3) аминотрансфераза
4) декарбоксилаза
5) каталаза
2. Лизосомальные ферменты относятся к классу:
1) оксидоредуктаз
2) трансфераз
3) гидролаз
4) лиаз
5) изомераз