Упрощенная HTML-версия
2. Написать реакции гидролиза сахарозы, мальтозы, лактозы, крахмала,
олеодипальмитина. Указать класс ферментов, катализирующих данные процессы.
3. Написать реакции переаминирования при участии аланинаминотрансферазы
(АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ).
Определение активности ферментов
Чтобы оценить количество фермента пользуются условными величинами,
характеризующими активность фермента. За активность фермента (Е) принимают количество
субстрата (S) или продукта реакции (Р), превращенного в единицу времени (t).
Методы определения активности ферментов могут быть разделены на две основные
группы.
1.
Метод конечной точки.
В данном случае определяется конечный продукт,
образовавшийся после известного периода инкубации фермента с субстратом в
соответствующем буфере, путем измерения опытной и контрольной проб, т. е. измерение
проводится в двух точках. Для этого используется специальная химическая реакция.
Количество вещества определяется фотометрически.
2.
Кинетический метод,
с помощью которого в ходе ферментативной реакции
непрерывно или периодически определяют потребление субстрата, кофермента либо
образование метаболита за выбранные промежутки времени. Этот метод называют также
методом непрерывной регистрации.
Условия определения активности ферментов
Для определения активности фермента необходимо соблюдать стандартные условия,
которые устанавливаются для каждого фермента из его кинетических характеристик.
1. Необходимо использовать оптимальное для определяемого фермента значение
рН среды.
2. Концентрация субстрата должна быть больше насыщающей, при которой
поддерживается максимальная скорость реакции.
3. Для сложных ферментов концентрация кофакторов и коферментов тоже должна
превышать насыщающую.
4. Стандартная температура для проведения ферментативной реакции должна
быть постоянной +25оС (измерение при других температурах специально оговаривается в
опыте).
Эти стандартные условия обеспечивают скорость реакции, при которой изменение
концентрации субстрата или продукта реакции зависит только от количества добавленного в
среду фермента.
В клинико-диагностических лабораториях определение активности ферментов в
биологических жидкостях и тканях проводится прежде всего с целью диагностики многих
заболеваний и оценки эффективности проводимых лечебных мероприятий. В фармации оно
необходимо для контроля качества ферментных препаратов.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №1:
«ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ СЫВОРОТКИ
КРОВИ»
Принцип метода.
Метод основан на способности фермента гидролизовать эфирную
связь в n-нитрофенилфосфате. Освобождающийся n-нитрофенол в щелочной среде дает