Упрощенная HTML-версия
Тема занятия:
«ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ.
КЛАССИФИКАЦИЯ БЕЛКОВ. ХАРАКТЕРИСТИКА
ПРОСТЫХ БЕЛКОВ И НУКЛЕОПРОТЕИНОВ»
Вопросы для самоподготовки
1. Принципы классификации белков (по строению, по биологическим функциям,
по физико-химическим свойствам и др.). Семейства белков.
2. Характеристика альбуминов и глобулинов, их свойства и функции.
3. Гистоны и протамины, состав и биологические функции белков.
4. Нуклеопротеины. Дезоксирибонуклеопротеины и рибонуклеопротеины.
Нуклеосома – структурная единица хроматина.
5. Первичная структура ДНК и РНК. Пуриновые и пиримидиновые основания.
Строение мононуклеотидов, образование 3’, 5’ - фосфодиэфирной связи.
6. Вторичная и третичная структуры ДНК, их характеристика. Типы связей,
стабилизирующих двойную спираль ДНК. Комплементарность оснований.
7. Вторичная и третичная структуры РНК, ее функциональные виды(и-РНК, т-
РНК, р-РНК). Строение т-РНК. Рибозимы – новый тип биокатализаторов.
Лабораторная работа №1:
«РАЗДЕЛЕНИЕ АЛЬБУМИНОВ И ГЛОБУЛИНОВ БЕЛКОВ СЫВОРОТКИ
КРОВИ МЕТОДОМ ВЫСАЛИВАНИЯ»
Высаливание - обратимая реакция осаждения белков из растворов с помощью больших
концентраций солей. Для высаливания чаще всего используют сульфат аммония,
отличающийся очень высокой растворимостью в воде, а также сульфат натрия, хлорид
натрия и другие соли щелочных и щелочноземельных металлов.
При высаливании происходят дегидратация макромолекул белка и потеря заряда. На
процесс высаливания влияет ряд факторов: гидрофильность белка, его относительная
молекулярная масса, заряд, в связи с чем для высаливания различных белков требуется
разная концентрация одних и тех же солей. Альбумины осаждаются в насыщенном растворе
(NH4)2SO4, а глобулины в полунасыщенном, т. к. у глобулинов большая относительная
масса, чем у альбуминов.
Ход работы.
К 10 каплям сыворотки крови добавляют 10 капель насыщенного
раствора сульфата аммония и смешивают. Получается полунасыщенный раствор сульфата
аммония, в котором выпадает осадок глобулина. Через 5 минут осадок отфильтровывают. К
фильтрату добавляют измельченный порошок сульфата аммония до полного насыщения (т.е.
пока новая порция порошка остается нерастворенной). Выпавший осадок альбумина
отфильтровывают. С фильтратом проделывают биуретовую реакцию для доказательства
отсутствия белка. Метод высаливания белков используется в клинической практике в
диагностических целях для разделения альбуминов и глобулинов и определения альбумино-
глобулинового коэффициента в сыворотке крови. В научно-исследовательских лабораториях
при выделении и очистке различных белков (ферменты, гормоны и др.), а также в
производственных условиях для получения белковых препаратов (лечебные сыворотки,
кристаллические белки и др.