Упрощенная HTML-версия
Лабораторная работа №2:
«РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
НА БУМАГЕ»
Электрофорез представляет собой один из наиболее удобных методов для анализа
белков сыворотки крови и их фракционирования.
При помощи электрофореза на бумаге белки сыворотки крови можно разделить на 5-7
фракций: альбумины, альфа1, альфа2, бета-, гамма-глобулины.
Принцип метода электрофореза основан на том, что белки, обладая электрическим
зарядом, могут передвигаться в электрическом поле с различной скоростью. Скорость
перемещения молекул различных белков в электрическом поле зависит от величины заряда,
молекулярной массы, условий опыта.
Разделение белков проводится в аппарате для электрофореза на специальной
хроматографической бумаге. Образцы исследуемой сыворотки крови, обладающие зарядом,
наносятся на полоски бумаги, смоченные буферным раствором, через которые пропускается
постоянный электрический ток.
Под воздействием электрического поля белковые фракции перемещаются к полюсу с
противоположным зарядом. При этом белки сыворотки крови при рН 8,6 заряжаются
отрицательно и перемещаются в электрическом поле от катода к аноду. Быстрее к аноду
будет двигаться более легкая фракция - альбумины.
Затем электрофореграммы окрашиваются красителем, в состав которого входит
бромфеноловый синий. На электрофореграмме четко выявляются полосы, соответствующие
определенным фракциям белков сыворотки крови, производится их количественная оценка.
Содержание белковых фракций сыворотки крови, полученные при помощи
электрофореза на бумаге, колеблется в следующих пределах:
Альбумины - 55-68 %
Альфа1-глобулины - 3-6 %
Альфа2-глобулины - 7-10 %
Бета-глобулины - 8-12 %
Гамма-глобулины - 13-19 %
К другим видам электрофореза, применяемым в настоящее время, относится
электрофорез на пленках из ацетата целлюлозы, который по сравнению с бумажным
электрофорезом обладает рядом преимуществ: химическая однородность ацетата и
одинаковый размер пор позволяет увеличить четкость разделения; время, необходимое для
разделения, значительно меньше, чем при элетрофорезе на бумаге; для получения четкой
элктрофореграммы достаточно 0,1-0,3 мкл образца; фон, получаемый после прокрашивания,
легко отмывается (см. рис. 2).
Особый интерес представляет диск-электрофорез в полиакриламидном геле. При этом
в сыворотке крови получается более 20 фракций белков. Электрофорез в агаровом и
крахмальном гелях применяют реже.
Клинико-диагностическое значение
Характер и степень изменения белковых фракций сыворотки крови при различных
патологических состояниях представляет большой интерес для диагностических целей.
Содержание белковых фракций изменяется при различных патологических
состояниях. Наиболее часто встречается уменьшение содержания альбуминов и увеличение
глобулинов. Уменьшение альбуминов наблюдается в результате нарушения его синтеза при
дефиците пластического материала (голодание, нарушение всасывания аминокислот при
энтеритах), снижении синтетической функции печени (циррозы, токсические поражения),