Упрощенная HTML-версия
2. Имидольная форма (рН 10) уже имеет такую систему и обладает
характерным поглощением с mах=240 нм.
3. Диимидольная форма также обладает характерным поглощением с
mах=255-260 нм. Здесь происходит удлинение хромофорной системы за
счет образования еще одной двойной связи и, соответственно этому
батохромный сдвиг максимума (в длинноволновую область).
В отличие от 5,5-двузамещенных барбитуратов, трехзамещенные имеют лишь
одну ионизированную форму (имидольную), поэтому их поглощение не меняется с
переходом от рН 10 к рН 13, и они обладают одним максимумом в щелочной среде
при длине волны 245 нм.
Таким образом, УФ-спектроскопия дает возможность дифференцировать
барбитураты в зависимости от типа замещения в пиримидиновом кольце на:
1. Двузамещенные
(рН 2 - нет max, рН 10 - 240 нм, рН 13 -255-260 нм).
2. Трехзамещенные
(рН 2 - нет max, рН 10 и рН 13 -245 нм).
3. Тиобарбитураты
(рН 2 - 239 нм и 290 нм, рН 10 - 255 и 310 нм, рН 13 –
310 нм).
Однако, дифференциация отдельных представителей внутри каждого из типов
замещения затруднительна, т.к. их спектры сходны между собой.
Применение спектральных методов анализа требует высокой степени чистоты
выделенных веществ и должно сочетаться с их хроматографической очисткой.
Заключение о присутствии барбитуратов дается по комплексу результатов
реакций, ХТС и УФ-спектроскопии.
4 этап. Для количественного определения барбитуратов в настоящее время
используется спектрофотометрический метод. При спектрофотометрическом
определении барбитуратов, выделенных из биологического материала, используют
принцип дифференциальной спектрофотомерии, т.к. прямому СФ-определению
мешают посторонние вещества, извлекающиеся из объекта исследования совместно
с барбитуратами.
В I варианте концентрацию барбитурата в растворе (после его элюирования с
пластинки) определяют по разности абсорбции в щелочном - рН 10 и кислом - рН 2
растворах при =240 нм.
=DрH
10
-DpH
2