Упрощенная HTML-версия
полученного извлечения от балластных веществ. Хроматографирование ведут на
пластинках с закрепленным слоем силикагеля в системах растворителей:
1)
хлороформ-ацетон (9:1)
- для разделения N - замещенных и 5 5-
замещенных производных, система является общей в скрининге
лекарственных веществ кислого и нейтрального характера.
2)
толуол - ацетон - этанол - 25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5)
(применяется в экспресс- анализе интоксикаций)
3)
хлороформ - н-бутанол - 25% раствор аммиака (70:40:5) - в качестве
частной системы для разделения 5,5 -замещенных барбитуратов.
Детектирование веществ на хроматограмме проводится двумя реагентами:
дифенилкарбазоном (ДФК) и HgS0
4
. При этом в местах расположения барбитуратов
возникают красно- или сине-фиолетовые пятна. Идентификация проводится по
величине R
f
(отношение длины пробега вещества к длине пробега растворителя).
Хроматографирование ведут параллельно метчикам (А), в качестве которых
используют хлороформные растворы барбитуратов с известной концентрацией.
Применение
метчиков
наряду
с
расчетом
R
f
обусловлено
невоспроизводимостью R
f
из-за трудности соблюдения стандартных условий при
хроматографировании. Чувствительность реакции барбитуратов с ДФК и HgSО
4
достигает 0,5 мкг, однако, она неспецифична, поэтому дальнейшее подтверждение
присутствия барбитурата производится микрокристаллическими реакциями,
исследованием в УФ-области спектра после элюирования вещества с пластинки
подходящим растворителем (боратный буфер с рН=10).
Спектроскопическое исследование
барбитуратов чаще проводят в области
длин волн 200-400 нм, т.е. в УФ-области спектра, получая электронные спектры
поглощения (что обусловлено наличием в структуре системы хромофоров и
ауксохромов). Способность барбитуратов к абсорбции в УФ-области связана с их
таутомерными превращениями.
Для 5,5-замещенных производных:
1. Имидная форма (рН 2) не абсорбирует в УФ области, т.к. здесь
отсутствует хромофорная система (система сопряженных простых и
двойных связей).